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        1. 上海拜力生物科技有限公司

          抗體定制技術(shù)服務|實驗技術(shù)服務

          時間:2015-8-1閱讀:70

          關(guān)鍵詞:抗體定制技術(shù)服務|實驗技術(shù)服務
          簡介:世界*品牌抗體定制技術(shù)服務|實驗技術(shù)服務原裝,質(zhì)量保證,*。
          抗體定制技術(shù)服務|實驗技術(shù)服務——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
          我們具備豐富的蛋白表達設計經(jīng)驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒,客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復我們的實驗結(jié)果。
          產(chǎn)品品牌:   http://www.。。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
          測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>抗體檢測服務
          ELISA(酶聯(lián)免疫吸附實驗)
          Dot Blot(斑點印跡實驗)
          Western Blot(免疫印跡實驗)
          IHC (免疫組織化學實驗)
          抗體標記服務
          HRP(辣根過氧化物酶)
          Biotin(生物素)
          操作方法
          ⑴準備好脾細胞。
          ⑵在50ml沉淀管中混合108脾細胞和107小鼠骨髓瘤細胞,并加入50ml2.5%FCS-1640液。
          ⑶室溫400g離心3min,使細胞沉淀。
          ⑷移去上清液。
          ⑸輕敲管底部,使沉淀流動,把沉淀管放于40℃水浴中,使其達融合溫度。
          ⑹加預熱至40℃的50%PEG0.8ml,用1ml吸管緩慢滴加,邊加邊搖沉淀管,肉眼觀察可見有顆粒出現(xiàn),滴加過程要求持續(xù)2min。
          ⑺加1ml1640液,邊加邊搖動,持續(xù)1min。
          ⑻重復⑺一次。
          ⑼加1ml1640液,邊加邊搖動,持續(xù)0.5min。
          ⑽重復⑼一次。
          ⑾加1640液15ml。
          ⑿室溫,400g離心1min,使細胞沉淀。
          ⒀去上清,輕敲管底部,加25ml含有HAT的*1640液。
          ⒁往已于前一日種有飼養(yǎng)細胞的40孔塑料培養(yǎng)盤中滴加融合的細胞液,每孔1滴(約0.05ml)。
          ⒂輕搖后,放入5%CO2飽和濕度的37℃溫箱中培育。
          ⒃第3、6、9、10日換入含HAT的*1640培養(yǎng)液。注意輕輕吸取上清液,勿將固定于孔底的細胞吸出,根據(jù)需要加入適量的飼養(yǎng)細胞。
          ⒄于第12、15日加入含有HAT的*1640培養(yǎng)液。在每次換液前用倒置顯微鏡觀察,大約在10天左右就可觀察到雜交瘤細胞生長出來。大多數(shù)雜交瘤細胞在10~20天內(nèi)出現(xiàn),但也有在1個月左右才能出現(xiàn)的。雜交瘤細胞出現(xiàn)后,吸取上清液,檢查抗體。
          ⒅對繼續(xù)生長的雜交瘤細胞進行增殖傳代。在傳代過程中,依情況取消HAT液和*1640液而代之以10%FCS-1640液。同時保存于液氮和進行克隆化,在這期間每代都要檢查抗體,以防止產(chǎn)生抗體細胞的變異和丟失。

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