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關(guān)鍵詞:真核表達(dá)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)
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真核表達(dá)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
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測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>pEGFP-N1載體具有以下幾方面特點:
①從結(jié)構(gòu)上看,該質(zhì)粒具有很強(qiáng)的復(fù)制能力,可以滿足隨宿主細(xì)胞分裂時跟隨胞質(zhì)遺傳給新生的子細(xì)胞,這(圖)真核細(xì)胞表達(dá)載體
真核細(xì)胞表達(dá)載體
是保證目的基因穩(wěn)定表達(dá)的因素之一;
②含有的功能強(qiáng)大的啟動子SV40和PCMV,可以使目的基因在增殖的細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá);
③具有多克隆位點,便于目的基因的插入;
④該載體具有neo基因,可以采用G418來篩選已成功轉(zhuǎn)染了該載體的靶細(xì)胞。
綠色熒光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)基因來源于Jellyfish Aequorea Victoria, 是Shimomura等于1962年發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì),由238個氨基酸組成,分子量約為27Kd。GFPGFP在包括熱、PH和化學(xué)變性劑等苛刻條件下都很穩(wěn)定,用甲醛固定后會持續(xù)發(fā)出熒光,但在還原環(huán)境下熒光會很快熄滅。
與以往常用的報告基因相比,GFP具有以下優(yōu)點:
①在熒光顯微鏡下,用波長約490 nm的紫外線激發(fā)后,即可觀察到綠色熒光,直接、簡捷、便于檢測;
②無需任何的作用底物或共作用物,檢測的靈敏度不受反應(yīng)效率的影響,保證了*的檢出率;
③蛋白本身性質(zhì)穩(wěn)定;
④可在多種異源生物中表達(dá)且無細(xì)胞毒性;
⑤其基因片段長度較小(約717 bp),易于構(gòu)建融合蛋白,且融合蛋白仍能保持熒光激發(fā)活性,為研究其他基因表達(dá)產(chǎn)物的分布提供了方便。EGFP是一種優(yōu)化的突變型GFP,使其產(chǎn)生的熒光較普通GFP強(qiáng)35倍,大大增強(qiáng)了其報告基因的敏感度。EGFP與其他蛋白的融合表達(dá)已有很多成功的例子,而且其N及C端均可融合,并不影響其發(fā)光。
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