關(guān)鍵詞:Transwell實(shí)驗(yàn)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
簡(jiǎn)介：世界*品牌Transwell實(shí)驗(yàn)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝，質(zhì)量保證,*。
Transwell實(shí)驗(yàn)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧，承諾客戶不成功不收費(fèi)。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時(shí)，我們也會(huì)提供相應(yīng)的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費(fèi)精力重復(fù)實(shí)驗(yàn)。另一方面，我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒，客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品品牌：   http://www.。。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程：
(1).共培養(yǎng)體系：
小于3.0um孔徑條件下，細(xì)胞不會(huì)遷徙通過(guò)，因此，若研究不涉及細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力，不需要細(xì)胞穿過(guò)聚碳酸酯膜，則應(yīng)選擇3.0μm以下孔徑。常用0.4、3.0μm。我們實(shí)驗(yàn)室用的是0.4μm。
將細(xì)胞A種于上室，細(xì)胞B種于下室，可以研究細(xì)胞B分泌或代謝產(chǎn)生的物質(zhì)對(duì)細(xì)胞A的影響。
(2).趨化性實(shí)驗(yàn)
可用5.0、8.0、12.0μm膜，上室細(xì)胞可穿過(guò)聚碳酸酯膜進(jìn)入下室，計(jì)數(shù)進(jìn)入下室的細(xì)胞量可反映下室成分對(duì)上室細(xì)胞的趨化能力。
①細(xì)胞B對(duì)細(xì)胞A的趨化作用：將細(xì)胞A種于上室，細(xì)胞B種于下室，可以研究細(xì)胞B分泌或代謝產(chǎn)生的物質(zhì)對(duì)細(xì)胞A的趨化作用。
②趨化因子對(duì)細(xì)胞的趨化作用：將細(xì)胞種于上室，下室加入某種趨化因子，可研究該趨化因子對(duì)細(xì)胞的趨化作用。
(3).腫瘤細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
常用8.0、12.0μm膜，上室種腫瘤細(xì)胞，下室加入FBS或某些特定的趨化因子，腫瘤細(xì)胞會(huì)向營(yíng)養(yǎng)成分高的下室跑，計(jì)數(shù)進(jìn)入下室的細(xì)胞量可反映腫瘤細(xì)胞的遷移能力。
(4).腫瘤細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)
常用8.0、12.0μm膜，原理與腫瘤細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)類似。
② 上層培養(yǎng)液：
上層培養(yǎng)液采用無(wú)血清培養(yǎng)基，為維持滲透壓，需加入0.05%-0.2% BSA。
③ 細(xì)胞：
值得注意的是，有侵襲能力的細(xì)胞才可用于Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)。建議實(shí)驗(yàn)前先用酶譜法檢測(cè)MMPs的表達(dá)，特別是MMP-2的表達(dá)。如果不清楚細(xì)胞MMPs的表達(dá)情況，就盲目進(jìn)行Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)，可能會(huì)造成不必要的浪費(fèi)，一次Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)花錢少則數(shù)百，多則數(shù)千，并不是筆小數(shù)目，還是小心為妙。
另外，為了讓實(shí)驗(yàn)結(jié)果更明顯，可先撤血清讓細(xì)胞饑餓12－24h，再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
④ 基質(zhì)膠：
常用的是人工重構(gòu)基底膜材料Matrigel，主要成分為層黏連蛋白和Ⅳ型膠原，生產(chǎn)廠家有BD、美國(guó)Collaborative Rsearch公司等。CaoY戰(zhàn)友的帖這么說(shuō)的：Matrigel是BD公司生產(chǎn)的，是一種細(xì)胞外基質(zhì)，4度時(shí)是液體，在37度會(huì)逐漸凝固成膠狀，不可逆。同樣的東西在sigma叫ECM。zhangyong1036戰(zhàn)友提供的價(jià)格：BD公司的matrigel 1500左右。
如果購(gòu)買的小室是已經(jīng)鋪好基質(zhì)膠的，那么Matrigel就不需要購(gòu)買了。
⑤ 下層培養(yǎng)液：
下層常用含5%－10% FBS的培養(yǎng)基，具體濃度根據(jù)細(xì)胞侵襲力而定，侵襲力弱的細(xì)胞可適當(dāng)提高FBS濃度。下層也可用趨化因子，有戰(zhàn)友將纖維粘連蛋白加入下層培養(yǎng)液作為趨化因子，但個(gè)人認(rèn)為，F(xiàn)BS仍是zui合適的。
⑥ 細(xì)胞培養(yǎng)板：
常用于Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞培養(yǎng)板有6孔板、12孔板、24孔板等，以24孔zui常用。細(xì)胞培養(yǎng)板沒(méi)什么特殊要求，普通的細(xì)胞培養(yǎng)板就可以。但要注意，細(xì)胞培養(yǎng)板應(yīng)當(dāng)與購(gòu)買的Transwell小室相配套。
⑦ 此外，膜的下室面可涂上纖維粘連蛋白(fibronectin，F(xiàn)N，Sigma有售)，這樣做的目的是使穿過(guò)膜的細(xì)胞更好地附著在膜上，也可用膠原（collagen）或明膠（gelatin）。很多戰(zhàn)友認(rèn)為這不是必須的，而且我也是不涂的，細(xì)胞照樣貼壁很好。如果貼壁不好的話可以試試看。linanping1979戰(zhàn)友認(rèn)為，如果培養(yǎng)時(shí)間很長(zhǎng)（>24h），細(xì)胞還是會(huì)掉到下室里面去，所以有條件的話，還是在膜下層涂上FN。