關(guān)鍵詞:DNA合成技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
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DNA合成技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
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測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程：
DNA復(fù)制的一般過(guò)程：
脫氧核糖核酸(DNA)是生物界遺傳的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。生物有機(jī)體的遺傳特征以密碼(code)的形式編碼在DNA分子上，表現(xiàn)為特定的核苷酸排列順序-即遺傳信息，在細(xì)胞分裂前通過(guò)DNA的復(fù)制(Replication)，將遺傳信息由親代傳遞給子代，在后代的個(gè)體發(fā)育過(guò)程中，遺傳信息自DNA轉(zhuǎn)錄(Transcription)給RNA，并指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成，以執(zhí)行各種生命功能，使后代表現(xiàn)出與親代相似的遺傳性狀，這種遺傳信息的傳遞方向，是從DNA到RNA再到蛋白質(zhì)，即所謂的生物學(xué)“中心法則"，
DNA復(fù)制起始的關(guān)健步驟是前導(dǎo)鏈DNA的合成，一旦前導(dǎo)鏈DNA的聚合作用開(kāi)始，隨從鏈DNA的合成也隨著開(kāi)始。由于前導(dǎo)鏈的合成是連續(xù)進(jìn)行的，所以它的起始相對(duì)簡(jiǎn)單，而隨從鏈的合成是不連續(xù)進(jìn)行的，所以引發(fā)階段比較復(fù)雜。大腸桿菌的引發(fā)前體由Dna B. Dna C和單鏈結(jié)合蛋白組成。
DNA復(fù)制的方向：
(1)定點(diǎn)開(kāi)始雙向復(fù)制：
這是原核生物和真核生物DNA復(fù)制zui主要的形式，從一個(gè)特定位點(diǎn)解鏈，沿著兩個(gè)相反的方向各生長(zhǎng)出兩條鏈，形成一個(gè)復(fù)制泡，用電子顯微鏡可以觀察到復(fù)制泡的存在。
(2)定點(diǎn)開(kāi)始單向復(fù)制：
質(zhì)粒colE1是個(gè)典型的例子，復(fù)制從一個(gè)起始點(diǎn)開(kāi)始，以同一方向生長(zhǎng)出兩條鏈，形成一個(gè)復(fù)制叉(replication fork)。
(3)兩點(diǎn)開(kāi)始單向復(fù)制：
腺病毒DNA的復(fù)制是從兩個(gè)起點(diǎn)開(kāi)始的，形成兩個(gè)復(fù)制叉，各以一個(gè)單一方向復(fù)制出一條新鏈。
DNA復(fù)制起始引發(fā)體的形成及所參與的酶和蛋白質(zhì)：
1.解鏈酶(helicase)
DNA開(kāi)始復(fù)制時(shí)首先在起始點(diǎn)處解開(kāi)雙鏈，反應(yīng)是在一種解鏈酶(helicase)的催化下進(jìn)行的。解鏈酶需要ATP分解供給能量。大腸桿菌中DnaB蛋白就有介鏈酶活性，與隨從鏈的模板DNA結(jié)合，沿5′→3′方向移動(dòng)，還有一種叫做Rep蛋白和前導(dǎo)鏈的模板DNA結(jié)合沿3′→5′方向移動(dòng)。解鏈酶的作用就是打開(kāi)DNA雙鏈之間的氫鍵。
2.單鏈結(jié)合蛋白：(single strand binding proteins, SSBP)
它與解開(kāi)的單鏈DNA結(jié)合，使其穩(wěn)定不會(huì)再度螺旋化并且避免核酸內(nèi)切酶對(duì)單鏈DNA的水解，保證了單鏈DNA做為模板時(shí)的伸展?fàn)顟B(tài)，SSBP可以重復(fù)利用。
DNA復(fù)制的延長(zhǎng)階段以及參與的酶和蛋白質(zhì)分子：
DNA的復(fù)制實(shí)際上就是以DNA為模板在DNA聚合酶作用下，將游離的四種脫氧單核苷酸(dATP,dGTP,dCTP,dTTP,簡(jiǎn)寫(xiě)為dNTP)聚合成DNA的過(guò)程。
這是一個(gè)非常復(fù)雜的酶促反應(yīng)，需要許多種酶和蛋白質(zhì)參與，現(xiàn)分別敘述它們?cè)贒NA復(fù)制中作用。
(一)DNA的聚合反應(yīng)和DNA聚合酶。