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細(xì)胞自噬染色檢測(cè)試劑盒(MDC法)

操作步驟(僅供參考)：

(一)、MDC單獨(dú)染色：

1、 用去離子水稀釋10×Wash buffer1×。

2、 800g離心5min，收集細(xì)胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗細(xì)胞1次，棄上清。

3、 加入適量的1×Wash buffer重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)并調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度10 6 /ml。

4、 取適量90μl的細(xì)胞懸液新的EP管中，加入10μl的MDC Stain，輕輕混勻。

5、 室溫避光染色15～45min。

6、 800g離心5min，收集細(xì)胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗細(xì)胞2次，棄上清。

7、 加入100μl的Collection buffer重懸細(xì)胞，滴加于載玻片上并加蓋玻片。

8、 熒光顯微鏡下觀察(激發(fā)濾光片波長(zhǎng)355nm，阻斷濾光片波長(zhǎng)512nm)，計(jì)數(shù)并拍照。

細(xì)胞自噬染色檢測(cè)試劑盒(MDC法)

(二)、與EB雙染色：

1、 用去離子水稀釋10×Wash buffer1×。

2、 800g離心5min，收集細(xì)胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗細(xì)胞1次，棄上清。

3、 加入適量的1×Wash buffer重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)并調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度10 6 /ml。

4、 取適量90μl的細(xì)胞懸液新的EP管中，分別加入10μl的MDC Stain和0.2μM EB染色液，輕輕混 勻。

5、 滴加于在玻片上，室溫避光染色15～30min，加蓋玻片。

6、 熒光顯微鏡下觀察(激發(fā)濾光片波長(zhǎng)512nm)，計(jì)數(shù)并拍照。

細(xì)胞自噬染色檢測(cè)試劑盒(MDC法)

注意事項(xiàng)：

1、 MDC Stain和EB試劑有一定毒性，請(qǐng)小心操作。

2、 吖啶橙染色常與EB染色合用，可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。

3、 操作過(guò)程中應(yīng)注意減少試劑暴露于強(qiáng)光下的時(shí)間。

4、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。