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檸檬酸（CA）含量測(cè)定試劑盒 微量法

測(cè)定意義：CA是生物體內(nèi)常見的有機(jī)酸，是重要的食品風(fēng)味物質(zhì)。此外，CA是三羧酸循環(huán)*步反應(yīng)的產(chǎn)物。

測(cè)定原理：酸性條件下，檸檬酸還原Cr6+生成Cr3+，在545nm處有特征吸收峰；通過測(cè)定545nm吸光值的增加，即可計(jì)算出樣品中檸檬酸含量。

需要的儀器，耗材:低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

 檸檬酸（CA）含量測(cè)定試劑盒 微量法

操作步驟：一、樣品中檸檬酸提取： 1. 液體樣品中檸檬酸提?。喝?0.1mL 液體加試劑一 0.9mL，充分混勻，11000g， 4℃離心 10min，取上清液，待測(cè)。 2. 組織中檸檬酸提?。喊凑战M織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。11000g，4℃離心 10min，取上清置冰上待測(cè)。 3. 線粒體中檸檬酸提?。喊凑战M織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，600g/min，4℃離心 5min；取上清另一 EP 管中，11000g， 4℃離心 10min，棄上清（此上清液可用于細(xì)胞質(zhì) CA 含量測(cè)定）；向沉淀中加試劑二 200μl，以及試劑三 2μl，充分懸浮溶解，11000g，4℃離心 10min，取上清液，待測(cè)。 4. 細(xì)菌、真菌中：按照細(xì)胞數(shù)量（10 4個(gè)）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入 1mL 試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）； 11000g，4℃離心 10min，取上清置冰上待測(cè)。二、測(cè)定操作： 1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長到 545 nm，蒸餾水調(diào)零。 2. 試劑一置于 30℃水浴中預(yù)熱 30min。 3. 空白管：取 0.5 mL EP 管，依次加入 20μL 蒸餾水，140μL 試劑一，20μL 試劑四，20μL 試劑五，混勻后室溫靜置 30min，于 545nm 測(cè)定吸光度，記為 A 空白管。 4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取 0.5 mL EP 管，依次加入 20μL 標(biāo)準(zhǔn)液，140μL 試劑一，20μL 試劑四，20μL 試劑五，混勻后室溫靜置 30min，于 545nm 測(cè)定吸光度，記為 A 標(biāo)準(zhǔn)管。 5. 測(cè)定管：取 0.5 mL EP 管，依次加入 20μL 上清液，140μL 試劑一，20μL 試劑四，20μL 試劑五，充分混勻后室溫靜置 30min，于 545nm 測(cè)定吸光度，記為 A 測(cè)定管。

 相關(guān)文獻(xiàn):

《Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis》 作者:Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou, Shuiqing Liu, Maojia Zhao, Yilu Qin, Rui Chen, Yong Teng & Manran Liu 期刊:Cell Death and Disease 影響因子:5.959 PMID:30850587
《Cancer-Associated Fibroblasts Accelerate Malignant Progression of Non-Small Cell Lung Cancer via Connexin 43-Formed Unidirectional Gap Junctional Intercellular Communication》 作者:Luo M,Luo Y, Mao N, Huang G, Teng C,Wang H, Wu J, Liao X, Yang J 期刊:Cellular Physiology and Biochemistry 影響因子: PMID:30453281