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PCR試劑 Pfu DNA Polymerase
貨號:PC1300
規(guī)格 :500U/1000U
濃度 :5U/ul
保存 :-20℃保存, 有效期少一年。
產(chǎn)品簡介 :
Pfu DNA Ploymerase 是從克隆有 Pyrococcus furiosis DNA Ploymerase 基因的大腸桿菌中表達并經(jīng)過柱純化分離出來的重組蛋白,其分子量為 90kD。由于 Pfu 酶具有 3’→5’核酸外切酶活性,它能糾正 DNA 擴增過程中產(chǎn)生的錯配,而傳統(tǒng)的 Taq 酶卻不能,其它耐熱 DNA Polymerase 如 Vent、Deep Vent、Tli、UITma 等雖具有校正功能, 但 Pfu 酶是目前已發(fā)現(xiàn)的所有耐熱 DNA Polymerase 中出錯率低的。 Pfu 酶無 5’→3’核酸外切酶活性,PCR 反應(yīng)中的延伸速度一般為 0.5-1kb/min,比 Taq 酶要低。Pfu 酶比 Taq 酶熱穩(wěn)定性更好,95 1 ℃ 小時仍保持90%以上的活性,對于 GC 含量很高的模板,變性溫度可以提高到 98℃而不影響其活性。Pfu 酶的 PCR 產(chǎn)物為平末端,可加 A 處理再與 T-載體連接或使用平末端克隆載體。
活性定義 :
1 單位(U) Pfu DNA Polymerase 活力定義為在 74℃,30 分鐘內(nèi),以活性化的大馬哈魚精子 DNA 作為模板/引物,將 10 nmol 脫氧核苷酸摻入到酸不溶物質(zhì)所需的酶量。
質(zhì)量控制 :
SDS-PAGE 檢測 Pfu DNA Polymerase 純度大于 99%; 經(jīng)檢測無外源核酸酶活性; PCR 方法檢測無宿主殘余DNA;能有效地擴增人類基因組中的單拷貝基因;室溫存放一周,無明顯活性改變。
酶貯存緩沖液 :
50mM Tris-HCl (pH 8.2); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50% glycerol;其他成份。
適用范圍 :
用于 DNA 的高保真擴增,如基因表達克隆、基因定點突變、細胞內(nèi)基因點突變的分析(SNP)和末端補平等。
建議 PCR 體系(以 50µl 反應(yīng)體系為例)
Template <0.5µg
上游引物(10µM) 1µl
下游引物(10µM) 1µl
10×Buffer(含 Mg 2+ ) 5µl
dNTP(各 2.5mM) 4µl
Pfu DNA Polymerase 0.5-1µl
ddH2O up to 50µl
注意事項 :
1、PCR 反應(yīng)體系加樣時,后一步加入 Pfu DNA Ploymerase,整個過程宜在冰上操作。
2、取 Pfu DNA Ploymerase 做 PCR 反應(yīng)時,請用高壓滅菌處理過的吸頭。
3、10×Pfu Buffer 中含 20 mM Mg 2+ ,如 PCR 反應(yīng)需要較高 Mg 2+ 濃度,請另行加入。
4、 用Pfu酶擴增時, 引物的純度要求較高, 引物長度大于18個堿基, Tm值在55-80℃之間, 引物濃度在0.1-0.5uM之間,比 Taq 酶略高。
相關(guān)產(chǎn)品 :
PC1320 2×Pfu PCR MasterMix ( 含染料)
PC2200 dNTPs Mix(10mM each)
D1020 10×DNA 上樣緩沖液
T1060 50×TAE 緩沖液
G8142 GoldView II 型核酸染色劑 (5000×)
PCR試劑 Pfu DNA Polymerase訂購說明:
1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨,一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。
2、部分非常用產(chǎn)品,需提前1-2日預(yù)訂,海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。
3、部分產(chǎn)品價格會因貨期、批次等因素發(fā)生變化,若有變動以訂貨當(dāng)日新價格為準。
4、每日訂單截止時間為16點整,部分城市可到17點整,因超過截止時間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
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運輸說明:
1、極低溫產(chǎn)品:極低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來,再用泡沫盒密封,膠帶層層粘住泡沫盒,放入索萊寶的箱子,然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實驗保駕護航。
2、低溫產(chǎn)品:低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來,再使用泡沫盒密封,用膠帶嚴實密封泡沫盒,再放入索萊寶的箱子(保溫效果少可以持續(xù)一周),然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實驗保駕護航。
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