目錄:北京索萊寶科技有限公司>>分子生物學(xué)>>DNA電泳>> G7140DNA電泳試劑 DNAGREEN 核酸染料
貨號 :G7140
規(guī)格:0.5ml (10000×)
保存:常溫運輸,4℃保存,有效期一年。
注意 :本產(chǎn)品屬于微量核酸檢測試劑,使用時請按照說明書操作。
產(chǎn)品簡介 :
目前常見的替代 EB 的核酸染料 SYBR Green I (屬于花氰類染料) 雖然毒性比 EB 低、 靈敏度比 EB 高,但由于其化學(xué)穩(wěn)定性差;此外,SYBR Green I 在電泳過程中能在 DNA 分子間移位,很容易使 DNA 條帶模糊和扭曲,電泳清晰度和分辨率下降。所以在實際應(yīng)用中依然不能有效替代 EB。本產(chǎn)品是同時具有 EB 穩(wěn)定性和 SYBR Green I 低毒性的新性核酸染料,其特點如下:
1. 低毒。其主要成分未發(fā)現(xiàn)對人體有致癌性、未被列入有毒有害品,有利于保護(hù)使用者的健康和保護(hù)日益惡化的環(huán)境。
2. 靈敏。檢測靈敏度跟 EB 相當(dāng),能滿足常規(guī)核酸電泳實驗要求。
3. 穩(wěn)定。對光、水和熱的穩(wěn)定性跟 EB 相當(dāng),可加入瓊脂糖凝膠中反復(fù)熔化。
4. 無分子間位移現(xiàn)象。不會出現(xiàn) SYBR 染料常見的條帶模糊和扭曲現(xiàn)象。
5. 使用方法多樣。既可以加入熔化的膠中,也可以電泳后染色,還可用于 PAGE。
6. 跟各種常用的核酸電泳緩沖液(如 SuperBuffer-2、TBE、TAE)兼容,但在 SuperBuffer-2 和 TBE 中背景低。
7. 觀察時不需要任何額外的儀器設(shè)備或 UV 光源,可以使用現(xiàn)成的觀察 EB 的 300nm UV。
8. 可用于 RNA 染色(也呈綠色)。
9. DNA 或 RNA 濃度較高時還可以直接在日光下觀察 (需要將膠放在黑色背景下) 。 由于避免了 UV 對 DNA的傷害,尤其適用于膠回收實驗。
使用方法:
電泳中染色:
本方法是將 DNAGREEN 直接加入溶化的凝膠中使用,只適用于瓊脂糖凝膠電泳,不適用于 PAGE。
1. 將 DNAGREEN 直接加入到融化的瓊脂糖凝膠中, 每 100mL 凝膠加 310 uL DNAGREEN, 混合均勻后倒膠。瓊脂糖凝膠中不能含任何其他染料(如 EB 和 SYBR Green I,否則會相互干擾) 。在 100mL 瓊脂糖凝膠中加入 DNAGREEN 的量不要超過 10 uL,否則背景增強。注意:一定要保證瓊脂糖*熔化,尤其是在*次熔化膠的時候,否則未熔化的小顆粒將產(chǎn)生跟染料相同的熒光。
2. 將 DNA 樣品與 DNA 上樣液按比例混合后上樣。注意:一定要使用不含 SDS 等去污劑的上樣液,否則SDS 會跟染料結(jié)合,極大地降低靈敏度。
3. 上樣后電泳,電泳參數(shù)同常規(guī)的電泳。
4. 電泳結(jié)束后在 300 nm 左右 的 UV 下觀察。
注意:不要使用波長為 260 nm 或 360 nm 的 UV,否則檢測靈敏度會降低。如果 DNA 或 RNA 濃度較高,還可以直接在日光下直接觀察(需要將膠放在黑色背景下) ,
避免 UV 對 DNA 的傷害,尤其適用于膠回收實驗。
5. 用配置了 520-550 nm 濾光片(一般呈黃色或深黃色)的相機拍照。注意:不要使用與 EB 兼容的紅色濾光片(它能阻擋 520-550 nm 的光) 。如果能再加上能濾去 UV 的濾光片,效果會更好。
6. 后續(xù) Southern、轉(zhuǎn)膜或 DNA 膠回收實驗按常規(guī)操作進(jìn)行。
電泳后染色:
本方法是在電泳后對 DNA 進(jìn)行染色,適用于瓊脂糖凝膠電泳和 PAGE。但該方法需要單獨的染色處理,染料用量較大,不推薦用于瓊脂糖凝膠的染色。
1. 按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。
2. 用去離子水將 DNAGREEN 稀釋 500 倍后(100 mL 水需要加 0.2 mL DNAGREEN) ,將凝膠放入,室溫下?lián)u晃染色 30 分鐘(對瓊脂糖凝膠)或 15 分鐘(對 PAGE) 。
3. 用水脫色 10-30 分鐘,具體時間需根據(jù)背景強弱決定。
注意:電泳后染色液可以反復(fù)使用次數(shù)。
疑難解答:
Q:本產(chǎn)品可否用于 RNA 染色?
A: 可以,不論 RNA 是在甲醛變性膠中電泳,還是在普通的 SuperBuffer-2、TBE 或 TAE 膠中電泳,RNA染色后在 300nm 下都跟 DNA 一樣呈綠色,
Q:本產(chǎn)品是否可以加入上樣液中進(jìn)行染色?
A:不行,本產(chǎn)品只能直接加入凝膠中進(jìn)行染色或電泳后再染色。
Q:為何前端(靠近正極)的 DNA 條帶很淡或根本看不見?
A:跟 EB 一樣,電泳時 DNAGREEN 朝負(fù)極方向移動,當(dāng)前端的 DNA(小片段)進(jìn)入沒有 DNAGREEN的區(qū)域時,已經(jīng)結(jié)合的染料分子會逐漸從 DNA 分子上脫落,所以條帶會變淡或根本看不見。解決辦法之一是縮短電泳時間或電泳后再染色;之二是在每 100 mL 電泳緩沖液中補加 3-5uL 染料。
Q:本產(chǎn)品在哪種緩沖液中效果好?
A:DNAGREEN 染料在不同緩沖液中背景熒光強度不同,從弱到強的順序是:SuperBuffer-2、TBE、TAE。
在背景較強的緩沖液體中,可以適當(dāng)降低染料的用量,比如 100mL 膠中加 3-5 uL。濃度需要稍做摸索。
Q:用 SYBR 染色的 DNA 在電泳時為何容易發(fā)生條帶模糊和扭曲現(xiàn)象?
A:SYBR 染料一般與 DNA 的小溝結(jié)合,但在常規(guī)電泳條件下該結(jié)合并不牢固,染料分子可以在標(biāo)記的和未
標(biāo)記的 DNA 分子之間轉(zhuǎn)移,使 DNA 分子的泳動速度時快(無染料結(jié)合時)時慢(有染料結(jié)合時) ,發(fā)生條帶模糊和扭曲現(xiàn)象。嵌入型染料(如 EB 和本產(chǎn)品)與 DNA 結(jié)合牢固,則無此現(xiàn)象。
相關(guān)產(chǎn)品 :
T1050 5×TBE 緩沖液
T1060 50×TAE 緩沖液
E1020 EB 溶液 (10mg/ml)
A1020 40% 丙烯酰胺( 19:1 )
D1010 6×DNA Lodding Buffer
M1060 D2000 DNA Ladder
PC1120 2×Taq PCR MasterMix ( 含染料)
DNA電泳試劑 DNAGREEN 核酸染料訂購說明:
1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨,一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。
2、部分非常用產(chǎn)品,需提前1-2日預(yù)訂,海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。
3、部分產(chǎn)品價格會因貨期、批次等因素發(fā)生變化,若有變動以訂貨當(dāng)日新價格為準(zhǔn)。
4、每日訂單截止時間為16點整,部分城市可到17點整,因超過截止時間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請辦理完貨款后,將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。
DNA電泳試劑 DNAGREEN 核酸染料運輸說明:
1、極低溫產(chǎn)品:極低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來,再用泡沫盒密封,膠帶層層粘住泡沫盒,放入索萊寶的箱子,然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實驗保駕護(hù)航。
2、低溫產(chǎn)品:低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來,再使用泡沫盒密封,用膠帶嚴(yán)實密封泡沫盒,再放入索萊寶的箱子(保溫效果少可以持續(xù)一周),然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實驗保駕護(hù)航。
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