線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅱ活性檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品名稱:：  線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅱ活性檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品英文名:Mitochondrial Respiratory Chain ComplexⅡActivity Assay Kit

產(chǎn)品貨號(hào)：BC3230           產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓

產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣         產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價(jià)格：2200
庫(kù)存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
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簡(jiǎn)要介紹：
線粒體復(fù)合體Ⅱ又稱琥珀酸-輔酶Q 還原酶，廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中，催化琥珀酸氧化生成延胡索酸，同時(shí)輔基FAD 還原為FADH2，后者進(jìn)一步還原氧化型輔酶Q 生成還原型輔酶Q，是呼吸電子傳遞鏈的支路。
    復(fù)合體Ⅱ的催化產(chǎn)物還原型輔酶Q 可進(jìn)一步還原2,6-二氯吲哚酚，2,6-二氯吲哚酚在605nm 有特征吸收峰，通過(guò)檢測(cè)2,6-二氯吲哚酚的減少速率來(lái)計(jì)算該酶活性。

產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體45mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體40mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1 支，-20℃保存；溶于1mL丙tong，可分裝后-20℃保存。臨用前再用丙tong100倍稀釋后使用。
試劑三：粉劑×1 支，4℃保存；臨用前加入2mL丙tong溶解備用。
試劑四：液體2.5mL×1 瓶，4℃保存；
產(chǎn)品說(shuō)明：
線粒體復(fù)合體Ⅱ又稱琥珀酸-輔酶Q 還原酶，廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中，催化琥珀酸氧化生成延胡索酸，同時(shí)輔基FAD 還原為FADH₂，后者進(jìn)一步還原氧化型輔酶Q 生成還原型輔酶Q，是呼吸電子傳遞鏈的支路。
復(fù)合體Ⅱ的催化產(chǎn)物還原型輔酶Q 可進(jìn)一步還原2,6-二氯吲哚酚，2,6-二氯吲哚酚在605nm 有特征吸收峰，通過(guò)檢測(cè)2,6-二氯吲哚酚的減少速率來(lái)計(jì)算該酶活性。
試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、丙tong、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、復(fù)合體Ⅱ的提取： 

1. 稱取約0.1g組織或收集500萬(wàn)細(xì)胞，加入1.0 mL提取液，用勻漿器或研缽于冰上勻漿。
2. 4 ℃ 600 g離心10min。
3. 將上清液移另一離心管中，4 ℃ 11000 g離心15min。
4. 上清液即胞漿提取物，可用于測(cè)定從線粒體泄漏的復(fù)合體Ⅱ（此步可選做，可以判斷線粒體提取效果）。
5. 在沉淀中加入400μL提取液，超聲波破碎（功率20％，超聲5秒，間隔10秒，重復(fù)15次），用于復(fù)合體Ⅱ酶活性測(cè)定，并且用于蛋白含量測(cè)定。

二、測(cè)定步驟：

1. 可見(jiàn)分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)605nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 樣本測(cè)定

1. 工作液的配制：臨用前將試劑二和試劑三按1：1混合，現(xiàn)用現(xiàn)配；
2. 將試劑一37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其他物種）預(yù)熱15min；
3. 在1mL玻璃比色皿中分別加入：

三、復(fù)合體Ⅱ活力單位的計(jì)算：  
（1） 按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯吲哚酚定義為一個(gè)酶活力單位。
復(fù)合體Ⅱ活力(U/mg prot)= [ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V 樣×Cpr) ÷T= 476.2×ΔA÷Cpr
V 反總：反應(yīng)體系總體積，10^-3 L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數(shù)，2.1×10⁴ L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.05mL；T：反應(yīng)時(shí)間，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL。
注意事項(xiàng)：

1. 為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，需先取1-2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)，如果測(cè)定的吸光值過(guò)高（高于1.5），可用蒸餾水稀釋上清液后再測(cè)定。計(jì)算結(jié)果時(shí)注意乘以稀釋倍數(shù)。若ΔA大于0.4，需將樣本稀釋適當(dāng)倍數(shù)（計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)）；若ΔA偏小，則可以通過(guò)增加加入的樣品體積來(lái)提高靈敏度。
2. 樣品蛋白濃度需自行測(cè)定，推薦我公司BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒。由于提取液中含有蛋白，所以在測(cè)定樣品蛋白濃度時(shí)需要減去提取液本身的蛋白含量。
3. 推薦使用樣本蛋白濃度計(jì)算酶活，若用樣本鮮重計(jì)算，則需加測(cè)胞漿提取物酶活，上清和沉淀酶活之和方為總酶活。
4. 本試劑盒試劑足夠完成25管反應(yīng)。
5. 附:使用樣本重量計(jì)算公式：（樣本檢測(cè)數(shù)為25T/12S）

A、上清中復(fù)合體II活力的計(jì)算:
按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯吲哚酚定義為一個(gè)酶活力單位。
復(fù)合體II活性（U/g）= [ΔA1×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(W÷V提取×V樣本)）÷T
                    =476.2×ΔA1÷W。
ΔA1：上清測(cè)定值；V 反總：反應(yīng)體系總體積，10^-3 L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數(shù)，2.1×10⁴ L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V提取：加入提取液體積，1mL ；V 樣：加入樣本體積，0.05mL；T：反應(yīng)時(shí)間，2 min；W：樣本重量，g。
B、沉淀中復(fù)合體II活力的計(jì)算:
按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯吲哚酚定義為一個(gè)酶活力單位。
復(fù)合體II活性（U/g）= [ΔA2×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(W÷V提取×V樣本)）÷T
                    =190.5×ΔA2÷W。
ΔA2：沉淀測(cè)定值；V 反總：反應(yīng)體系總體積，10^-3 L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數(shù)，2.1×10⁴ L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V提?。撼恋碇貞殷w積，0.4mL ；V 樣：加入樣本體積，0.05mL；T：反應(yīng)時(shí)間，2 min；W：樣本重量，g。
C、樣本復(fù)合體II總活力的計(jì)算:
樣本復(fù)合體II總活力即為上清中復(fù)合體II活力與沉淀中復(fù)合體II活力之和。
按樣本鮮重計(jì)算：
復(fù)合體II（U/g 鮮重）=476.2×ΔA1÷W +190.5×ΔA2÷W。

相關(guān)文獻(xiàn)：
《A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum》 作者:Qiuli OuYang, Nengguo Tao* and Miaoling Zhang 期刊:Frontier in Immunology 影響因子:4.259 PMID:29503638
《Age-dependent expression of the Vitamin D receptor and the protective effect of Vitamin D receptor activation on H2O2-induced apoptosis in rat intervertebral disc cells》 作者:TongTonga1ZhihuiLiub1HuaZhangcJingleiSuncDongxiaZhangdFengWangaDechaoMiaoaYongShen 期刊:Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology 影響因子:3.785 PMID:30905826
《Roles of TRPA1 and TRPV1 in cigarette smoke -induced airway epithelial cell injury model》 作者:Muyun Wang,Yanbei Zhang,Mengmeng Xu,HaiZhang,Yuqing Chen,Kian Fan Chung,Ian M.Adcock,Feng Li 期刊:Free Radic. Biol. Med. 影響因子:5.657 PMID:30639616