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        1. 上海拜力生物科技有限公司

          LTB ELISA

          時間:2020-7-8閱讀:431

          上海拜力生物科技中心,為您精心研發(fā)、細胞株產品。我們就是要做一件事,服務好廣大的科研大眾。
          產品名稱:LTB ELISA。

          類別 :ELISA
          貨期 :7-10天
          LTB ELISA。注意事項:
          收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當天進行檢測的標本,儲存在4℃?zhèn)溆?,如有特殊原因需要周期收集標本,將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復凍融。標本2-8℃可保存48小時,-20℃可保存1個月。-70度可保存6個月。部分標本需添加抑肽酶。
          1.  試劑準備:所有試劑都必須在使用前達到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染。
          2.   加樣:加樣或加試劑時,請注意在吸取標本 / 標準品,酶結合物或底物時,前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導致不同的 “預孵育"時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內,如標本數(shù)量多,推薦使用多道移液器加樣。
          3.   孵育:為防止樣品蒸發(fā),試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內,酶標板加上蓋或覆膜,以避免液體蒸發(fā);洗板后應盡快進行下步操作,任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
          4.   洗滌:洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干,勿將濾紙直接放入反應孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響后的讀數(shù)。
          5.  試劑配制:Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配置使用,并使用相應的稀釋液配制,不能混淆。請確配置標準品及工作液,盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時,一次不要小于10μl),以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差;請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
          6.  反應時間的控制:加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應,避免反應過強從而影響光密度讀數(shù)。
          7.  底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強光直接照射。
              建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準確性。
              如標本中待測物質含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。
          洗板方法
          1.  手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內,浸泡1-2分鐘,根據需要,重復此過程數(shù)次。
          2.  自動洗板:如果有自動,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
          液體類標本:
          標本必須為液體,不含沉淀。包括、、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的或。每個標本量收集體積=100ul×檢測種類。
          ◇      :
          室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。收集上清。如有沉淀形成,應再次離心。
          ◇      :
          應根據的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,加入10%(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。如有沉淀形成,應再次離心。
          ◇      尿液、胸腹水、腦脊液:
          用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。如有沉淀形成,應再次離心。
          ◇      細胞培養(yǎng)上清:
          檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
          ◇      組織標本:
          切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin(抑肽酶)。用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清置于-20度或- 70度保存,如有必要,可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
          寄標本時需注明以下情況:
          1、標本編號;2、所測項目;3、是否做復孔;4、實驗后標本是否寄回

          LTB ELISA 安全性
          1)避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
          2)實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
          3)不要用嘴吸取里的任何成份。

          LTB ELISA 操作注意事項
          1)試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
          2)實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
          3)不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
          4)使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
          5)使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻里的各種成份及樣品。
          6)洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
          7)底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
          8)加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
          9)按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

          LTB ELISA 樣品收集、處理及保存方法
          1)-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將和紅細胞迅速小心地分離。
          2)-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
          3)細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
          4)組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
          5)保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

          LTB ELISA 試劑的準備
          1)標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。
          2)洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。

          LTB ELISA 操作步驟
          1)使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
          2)根據待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數(shù)量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內。
          3)加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
          4)甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
          5)每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
          6)甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
          7)每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
          8)取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
          9)在450nm波長處測定各孔的OD值。
          一些好評
          辦事效率蠻高,幾天,就幫我搞定了這個,謝謝!盒子蠻不錯,包含所需試劑,并提供了中英文雙版說明書及增值稅,很,銷售人員的態(tài)度也謙和。靈敏度不錯,重復性也行,在我做的這些實驗中,與國內同行的盒子相比來說,性價比挺高的,尤其是價格占有不錯的優(yōu)勢,贊一個!操作挺方便的,也簡單,當然,這也多虧了公司的技術人員詳細的實驗指導,很好,謝謝,實驗也相當成功。實驗出來的標準曲線很不錯(很優(yōu)美),而且價格相對合理,技術指導很到位......我購買了兩盒,批次新,保質期內,實驗結果做出來了,貨到的挺快,那么遠,幾天就到了,加上我做實驗,一共五天就搞定了。經朋友介紹,購買了此公司的ELISA,用過,還不錯,實驗效果很好,基本達到實驗參數(shù)要求,如果,下次還做實驗的話,我還買這家的,朋友這幾年都在用這家的(長期訂貨)。
          LTB ELISA 局限
          6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到的結果。
          LTB ELISA 性能
          1. 靈敏度:小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990。
          2. 特異性:不與其它細胞因子反應。
          3. 重復性:板內、板間變異系數(shù)均小于10%。

          LTB ELISA  結果判斷與分析
          1、儀器值:于波長450nm的上讀取各孔的OD值
          2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的待測物質標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的待測物質含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

          wyn8024

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