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多酚氧化酶（PPO）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書微量法

注意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

貨號(hào)：BC0195

規(guī)格：100T/48S

產(chǎn)品內(nèi)容：提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存，用前混勻即可；試劑一：液體20mL×1瓶，4℃保存；試劑二：液體5mL×1瓶，4℃保存。

多酚氧化酶(PPO)活性生化檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明：PPO（EC1.10.3.1）是一種廣泛存在于植物體內(nèi)的含銅的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化產(chǎn)生醌，從而引起褐化，與果蔬加工、茶葉品質(zhì)和組培等密切相關(guān)。PPO能夠催化鄰苯二酚產(chǎn)生鄰苯二醌，后者在410nm有特征光吸收。

需自備的儀器和用品：可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、粗酶液提?。?/span>

1. 收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％，超聲3秒，間隔10秒，重復(fù)30次）；8000g4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測(cè)。
2. 稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測(cè)。

二、測(cè)定步驟：

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)410nm，蒸餾水調(diào)零。

2.樣本測(cè)定（在EP管中依次加入下列試劑）

充分混勻，5000g，常溫離心10min，收集上清，取200μL微量玻璃比色皿或96孔板中，410nm處檢測(cè)測(cè)定管和對(duì)照管吸光度，計(jì)算ΔA=A測(cè)定-A對(duì)照。

注意:每個(gè)測(cè)定管需要設(shè)置一個(gè)對(duì)照管,可以在不同對(duì)照管中加入不同樣品的粗酶液,然后集中進(jìn)行5min沸水浴處理。

多酚氧化酶(PPO)活性生化檢測(cè)試劑盒PPO活性計(jì)算：

a. 用微量玻璃比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：?jiǎn)挝坏亩x：每分鐘每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中使410nm處吸光值變化0.01定義為一個(gè)酶活力單位。PPO（U/mgprot）=ΔA÷0.01×V反總÷（Cpr×V樣）÷T=60×ΔA÷Cpr

1. 按樣本鮮重計(jì)算：?jiǎn)挝坏亩x：每分鐘每g組織在每mL反應(yīng)體系中使410nm處吸光值變化0.01定義為一個(gè)酶活力單位。PPO（U/g鮮重）=ΔA÷0.01×V反總÷（W÷V樣總×V樣）÷T=60×ΔA÷W
2. 按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算：?jiǎn)挝坏亩x：每分鐘每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每mL反應(yīng)體系中使410nm處吸光值變化0.01定義為一個(gè)酶活力單位。PPO（U/104cell）=ΔA÷0.01×V反總÷（500÷V樣總×V樣）÷T=0.12×ΔAb.

b. 用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：?jiǎn)挝坏亩x：每分鐘每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中使410nm處吸光值變化0.005定義為一個(gè)酶活力單位。PPO（U/mgprot）=ΔA÷0.005×V反總÷（Cpr×V樣）÷T=120×ΔA÷Cpr

1. 按樣本鮮重計(jì)算：?jiǎn)挝坏亩x：每分鐘每g組織在每mL反應(yīng)體系中使410nm處吸光值變化0.005定義為一個(gè)酶活力單位。PPO（U/g鮮重）=ΔA÷0.005×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T=120×ΔA÷W
2. 按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算：?jiǎn)挝坏亩x：每分鐘每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每mL反應(yīng)體系中使410nm處吸光值變化0.005定義為一個(gè)酶活力單位。PPO（U/104cell）=ΔA÷0.005×V反總÷（500÷V樣總×V樣）÷T=0.24×ΔAV反總：反應(yīng)體系總體積，0.3mL；V樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.05mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量，500萬(wàn)；T：反應(yīng)時(shí)間，10min。

注意事項(xiàng)：不同樣本的多酚氧化酶適合的反應(yīng)溫度略有差別，可在25-37℃之間進(jìn)行調(diào)節(jié)。

相關(guān)文獻(xiàn)：

《Effect of L-Arginine on Maintaining Storage Quality of the White Button Mushroom (Agaricus bisporus)》 作者:Beibei Li，Yang Ding，Xiuli Tang，Guoyi Wang，Shujuan Wu，Xianxian Li，Xiaofei Huang，Tongtong Qu，Jifeng Chen 期刊:Food and Bioprocess Technology 影響因子:3.032 PMID:
《MTA1 promotes the invasion and migration of pancreatic cancer cells potentially through the HIF-α/VEGF pathway》 作者:B Li, Y Ding, X Tang, G Wang, S Wu, X Li 期刊:Journal of Receptor and Signal Transduction Research. 影響因子:2.998 PMID:30396299