 | 重慶市華雅干細(xì)胞技術(shù)有限公司 |
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PEI Prime™?陽離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑，！
閱讀：1989發(fā)布時間：2020-12-25
隨著行業(yè)的發(fā)展，病毒載體的生產(chǎn)成為細(xì)胞和基因治療領(lǐng)域的核心技術(shù).而轉(zhuǎn)染是將外源核酸導(dǎo)入真核細(xì)胞的過程，是細(xì)胞和分子生物學(xué)研究的重要工具，也是大部分的生物和分子生物領(lǐng)域的小伙伴離不開的話題。但是可能大家經(jīng)常聽到的抱怨是"轉(zhuǎn)染效率太低""轉(zhuǎn)染完細(xì)胞全漂了""轉(zhuǎn)染后忘記給細(xì)胞換液了"，真所謂辛辛苦苦實(shí)驗(yàn)N多回，一夜回到解放前……
我們熟知的方法中脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染試劑包括中性脂質(zhì)體和陽離子脂質(zhì)體兩種。中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹DNA，借助脂質(zhì)膜將DNA導(dǎo)入細(xì)胞膜內(nèi)。目前應(yīng)用比較廣泛的是帶正電的陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，方法操作簡單，重復(fù)性好，在體外轉(zhuǎn)染中有很高的效率，但具有一定的細(xì)胞毒性，可能會干擾細(xì)胞的代謝。且活性受血清影響，需要去除血清。
陽離子聚合物的轉(zhuǎn)染試劑，帶正電的聚合物與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成帶正電的復(fù)合物后與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用，并通過內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞。其又分為樹枝狀陽離子聚合物和線性陽離子聚合物兩類，細(xì)胞毒性較小，但其轉(zhuǎn)染效率都高于脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染，適用也較為廣范。
陽離子聚合物 - 聚乙烯亞胺（PEI）是目前報道的工業(yè)化、大規(guī)模瞬時轉(zhuǎn)染表達(dá)重組蛋白領(lǐng)域泛使用的基因載體和轉(zhuǎn)染試劑。PEI 制備簡單，價格便宜，有線狀和枝狀兩種商業(yè)試劑可選，是瞬時轉(zhuǎn)染放大轉(zhuǎn)染試劑的*，是非常有潛力的非病毒質(zhì)粒載體試劑。
PEI Prime™?是美國SEROCHEM 公司研發(fā)的一 種高效、低毒、經(jīng)濟(jì)的新型轉(zhuǎn)染試劑。用于抗生素, 蛋白, 和病毒載體的轉(zhuǎn)染劑 - 聚乙稀亞胺(PEI)。PEI是的轉(zhuǎn)染方法并有效的用于在CHO和HEK細(xì)胞類型。
本轉(zhuǎn)染試劑操作簡單，5 分鐘實(shí)現(xiàn)快速轉(zhuǎn)染，在 HEK293T 細(xì)胞中轉(zhuǎn)染效率可達(dá) 95%以上。性價比高，適合常規(guī) 的轉(zhuǎn)染、蛋白表達(dá)、病毒包裝等大規(guī)模的轉(zhuǎn)染。
產(chǎn)品特點(diǎn)
高效、無毒：轉(zhuǎn)染效率高，重復(fù)性好，無明顯的細(xì)胞毒性；
操作簡單：使用方法和市面常見同類產(chǎn)品*一致；
應(yīng)用廣泛：貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞都適用，即可瞬時轉(zhuǎn)染，也可穩(wěn)定轉(zhuǎn)染
操作步驟
以6孔板為例
1. 轉(zhuǎn)染用細(xì)胞準(zhǔn)備：轉(zhuǎn)染前接種HEK293T細(xì)胞于合適的容器中，培養(yǎng)約24h，細(xì)胞密度70%-95% 為宜，活細(xì)胞密度為（1.5至2.0）x 106細(xì)胞/ mL確保細(xì)胞處于狀態(tài) 。
2. 將活細(xì)胞密度稀釋至1.05 x 106細(xì)胞/ mL；
3. 多次顛倒pDNA和PEI Prime™1 mg / mL試劑容器以充分混合。
4. 對于每個要轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)物，將1μgpDNA轉(zhuǎn)移至干凈的小瓶中。用新鮮培養(yǎng)基稀釋至40μg/ mL。
5. 對于每個要轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)物，將3μLPEI Prime™1 mg / mL轉(zhuǎn)移至干凈的小瓶中。使用培養(yǎng)基稀釋至120μg/ mL。
6. 將稀釋的pDNA和PEI Prime™混合在一起。倒轉(zhuǎn)幾次，讓其在室溫下靜置10分鐘。在使用前，輕輕將封閉的容器倒轉(zhuǎn)一次。
7. 每轉(zhuǎn)染95 mL培養(yǎng)物，使用5 mL pDNA / PEI混合物?；旌蠒r逐漸將混合物添加到培養(yǎng)物中。
8. 轉(zhuǎn)染后，培養(yǎng) HEK293T 細(xì)胞 18-72 小時后對細(xì)胞進(jìn)行鑒定或加入抗生素篩選穩(wěn)定克隆。
參考 | 范圍 |
PEI Concentration | 1.50 - 4.50 mg/L |
DNA Concentration | 0.75 -1.50 mg/L |
PEI/DNA Complex Time | 5.0 -15.0 minutes
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HEK293T細(xì)胞轉(zhuǎn)染48h熒光圖
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