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HY STEMCELL 人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基（無血清，臨床級(jí)）
閱讀：3480發(fā)布時(shí)間：2017-12-22
人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基已經(jīng)發(fā)展到了第三代：
*代 培養(yǎng)基+牛血清
第二代 培養(yǎng)基+牛血清替代品：人血清、血小板裂解液和臍帶血清
第三代 無血清、無動(dòng)物源、成分確定的培養(yǎng)基
第三代人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基不含牛血清或人血清之類的血清替代品，無動(dòng)物源而且成分確定，免除了異種血清帶來的病原體污染風(fēng)險(xiǎn)，而且批次穩(wěn)定，適合干細(xì)胞治療的臨床研究。
HY STEMCELL CCGmHuMTM 人間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基
中文名：HY STEMCELL CCGmHuMTM 人間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基
英文名：HY STEMCELL CCGmHuMTM Human MSCs Growth Medium
HY STEMCELL CCGmHuMTM 人間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基是成分確定、無血清、無異源物，無需鋪板膠的*培養(yǎng)基。適用臍帶或脂肪來源的人間充質(zhì)干細(xì)胞的原代培養(yǎng)擴(kuò)增。培養(yǎng)的hMSC可傳多代。
特點(diǎn)
Serum-free 無血清成分
Xeno-free 無動(dòng)物源
Chemically-defined 化學(xué)成分明確
NO plate coating necessary 無須昂貴的鋪板蛋白
Perform better than FBS medium 生長(zhǎng)分化優(yōu)于血清培養(yǎng)基
組份
HY STEMCELL CCGmHuMTM 人間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基包括【Basal Medium 基礎(chǔ)培養(yǎng)基】 和 【Supplement Medium 細(xì)胞因子添加物】?jī)刹糠??；A(chǔ)培養(yǎng)基中添加HEPES和L-谷氨酰胺。細(xì)胞因子添加物中含有多種細(xì)胞生長(zhǎng)因子、粘附蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、胰島素、微量元素和人白蛋白等成分。
產(chǎn)品 | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 儲(chǔ)存 |
CCGmHuM Human MSCs Medium | HX0201M | 套裝 |
|
CCGmHuM Human MSCs Basal Medium | HX0202M | 450mL | 2～8℃ |
CCGmHuM Human MSCs Supplement Medium 10X | HX0203M | 50mL | –20°C |
培養(yǎng)表現(xiàn)
使用HY StemCell CCGmHuMTM 人間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞，傳到第7代，MSC形態(tài)功能維持良好。
應(yīng)用
適用于原代培養(yǎng)臍帶或脂肪組織來源的人間充質(zhì)干細(xì)胞。
培養(yǎng)條件
培養(yǎng)基：*培養(yǎng)基
細(xì)胞系：臍帶或脂肪組織來源的人間充質(zhì)干細(xì)胞
細(xì)胞類型：貼壁
儲(chǔ)存
基礎(chǔ)培養(yǎng)基保存在2～8℃。細(xì)胞因子添加物保存在–20°C。
使用注意
為保障活性，建議把【Supplement Medium 細(xì)胞因子添加物】一次解凍后分裝再凍存，不宜反復(fù)凍融。
訂購(gòu)信息
品牌 | 貨號(hào) | 產(chǎn)品描述 | 包裝 | 目錄價(jià) |
HY StemCell | HX0201M | CCGmHuMTM Human MSCs Medium 人間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基 | 1 Kit | 3000元 |
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背景知識(shí)
2015年國(guó)家重新開放干細(xì)胞行業(yè)政策以來，衛(wèi)計(jì)委等已經(jīng)發(fā)布了多個(gè)文件：
《國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃干細(xì)胞與轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)重點(diǎn)專項(xiàng)實(shí)施方案（征求意見稿）》
目標(biāo)：凝聚優(yōu)勢(shì)力量，重點(diǎn)針對(duì)干細(xì)胞發(fā)生，發(fā)育和形成功能細(xì)胞過程中的重要科學(xué)問題，深入開展干細(xì)胞、生物材料、組織工程、生物人工器官，以及干細(xì)胞與疾病發(fā)生等方面的基礎(chǔ)研究、應(yīng)用基礎(chǔ)研究和轉(zhuǎn)化開發(fā)。整體提升我國(guó)干細(xì)胞及其轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的實(shí)力，加快科研成果的應(yīng)用。
任務(wù)：1. 多能干細(xì)胞干性維持機(jī)制。2. 組織干細(xì)胞的獲得及功能。3. 干細(xì)胞定向分化及細(xì)胞轉(zhuǎn)分化機(jī)制。4. 干細(xì)胞的體內(nèi)功能與作用機(jī)制。5. 基于干細(xì)胞的器官再造。6. 干細(xì)胞資源庫(kù)。7. 干細(xì)胞臨床前評(píng)估。8. 干細(xì)胞轉(zhuǎn)化與應(yīng)用。
《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則》（試行）（征求意見稿）
提出了適用于各類可能應(yīng)用到臨床的干細(xì)胞（除已有規(guī)定的造血干細(xì)胞移植外）在制備和臨床前研究階段的基本原則。每個(gè)具體干細(xì)胞制劑的制備和使用過程，必須有嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)操作程序并按其執(zhí)行，以確保干細(xì)胞制劑的質(zhì)量可控性以及治療的安全性和有效性。
培養(yǎng)基部分摘錄：
培養(yǎng)基 干細(xì)胞制劑制備所用的培養(yǎng)基成分應(yīng)有足夠的純度并符合無菌、無致病微生物及內(nèi)毒素的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),殘留的培養(yǎng)基對(duì)受者應(yīng)無不良影響；在滿足干細(xì)胞正常生長(zhǎng)的情況下，不影響干細(xì)胞的生物學(xué)活性，即干細(xì)胞的“干性”及分化能力。在干細(xì)胞制劑制備過程中，應(yīng)盡量避免使用抗生素。
若使用商業(yè)來源培養(yǎng)基，應(yīng)選擇有資質(zhì)的生產(chǎn)商并由其提供培養(yǎng)基的組成成分資料及相關(guān)質(zhì)量合格證明。必要時(shí)，應(yīng)由專業(yè)檢定機(jī)構(gòu)對(duì)每批培養(yǎng)基進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，并出具檢驗(yàn)報(bào)告。
除特殊情況外，應(yīng)盡可能避免在干細(xì)胞培養(yǎng)過程中使用人源或動(dòng)物源性血清，不得使用同種異體人血清或血漿。如必須使用動(dòng)物血清，應(yīng)確保其無特定動(dòng)物源性病毒污染。嚴(yán)禁使用海綿體狀腦病流行區(qū)來源的牛血清。
若培養(yǎng)基中含有人的血液成份，如白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和各種細(xì)胞因子等，應(yīng)明確其來源、批號(hào)、質(zhì)量檢定合格報(bào)告，并盡量采用國(guó)家已批準(zhǔn)的可臨床應(yīng)用的產(chǎn)品。
《干細(xì)胞臨床研究管理辦法（試行）》
關(guān)于干細(xì)胞臨床研究的醫(yī)療機(jī)構(gòu)的條件與責(zé)任、干細(xì)胞臨床研究的立項(xiàng)與備案、臨床研究流程及要求、臨床研究報(bào)告制度、專家委員會(huì)責(zé)任和監(jiān)督管理。
《*干細(xì)胞臨床研究機(jī)構(gòu)名單》*30家單位
《第二批干細(xì)胞臨床研究備案機(jī)構(gòu)》次批72家單位 2017年11月
《干細(xì)胞通用要求》
該要求圍繞干細(xì)胞制劑的安全性、有效性及穩(wěn)定性等關(guān)鍵問題，建立了干細(xì)胞的供者篩查、組織采集、細(xì)胞分離、培養(yǎng)、凍存、復(fù)蘇、運(yùn)輸及檢測(cè)等的通用要求
可見，干細(xì)胞治療的臨床研究正在標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范化。使用無血清培養(yǎng)基更加安全，監(jiān)管要求更少。
一 人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基的發(fā)展
人間充質(zhì)干細(xì)胞的來源
從1970年發(fā)現(xiàn)以來，脂肪組織、胎盤、牙髓、滑膜、外周血、牙周韌帶、子宮內(nèi)膜、臍帶和臍帶血中都有研究發(fā)現(xiàn)間充質(zhì)干細(xì)胞[1]，不過應(yīng)用比較多的來源還是骨髓、脂肪和臍帶組織中的間充質(zhì)干細(xì)胞[2]。目前，異體間充質(zhì)干細(xì)胞密度zui高來源是臍帶，每毫升zui高能獲得470萬個(gè)MSC，而自體間充質(zhì)干細(xì)胞密度zui高來源是脂肪組織，每毫升zui高能獲得155萬個(gè)MSC[3]。HY STEMCELL CCGmHuMTM 人間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基就是適用臍帶和脂肪組織來源的hMSC培養(yǎng)。
圖源網(wǎng)絡(luò)：臍帶和華通氏膠
人間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)發(fā)展[4]
人間充質(zhì)干細(xì)胞的下游應(yīng)用是組織修復(fù)等疾病治療，因此它的培養(yǎng)要滿足醫(yī)用的高標(biāo)準(zhǔn)。隨著臨床應(yīng)用的成熟，間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基也經(jīng)歷了從有血清到無血清培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)變。
有血清培養(yǎng)基一開始使用的是胎牛血清，胎牛血清是天然產(chǎn)品，批次間差異大，影響實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定性，尤其還是異源物，會(huì)有病原體污染風(fēng)險(xiǎn)和免疫影響，不利治療安全，需要額外監(jiān)管。于是越來越多的血清培養(yǎng)基選擇了自體或同源異體的人源血清作為培養(yǎng)基添加物，包括人血清、血小板裂解液和臍帶血清。
低血清或人源血清仍然不夠穩(wěn)定，也不能*免除病原體的污染風(fēng)險(xiǎn)，隨之興起的是成分確定的無血清培養(yǎng)基。無血清培養(yǎng)基用重組人蛋白代替血清中的天然蛋白，以此來消滅異種蛋白輸入人體可能會(huì)引起的免疫抗體反應(yīng)。比如血清中zui基礎(chǔ)的白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和胰島素，無血清培養(yǎng)基都改用重組人轉(zhuǎn)鐵蛋白和重組人胰島素代替，而不是提取天然產(chǎn)物。無血清培養(yǎng)基發(fā)展中，確定了多種生長(zhǎng)因子是人間充質(zhì)干細(xì)胞擴(kuò)增必須添加的。HY STEMCELL CCGmHuMTM 人間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基細(xì)胞因子添加物中含有多種細(xì)胞生長(zhǎng)因子、粘附蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、胰島素、微量元素和人白蛋白等成分。
二 人類間充質(zhì)干細(xì)胞的分離與原代培養(yǎng)方法[5]
新生兒臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分離與原代培養(yǎng)
新生兒臍帶組織剝?nèi)∪A通氏膠，以組織塊培養(yǎng)法或酶消化法分離新生兒間充質(zhì)干細(xì)胞，
貼壁法做原代培養(yǎng)。
新生兒臍帶血來源間充質(zhì)干細(xì)胞分離與原代培養(yǎng)
新生兒臍帶血樣本，與磷酸緩沖液 1:1 稀釋后，以密度梯度離心法分離單個(gè)核細(xì)胞，貼壁法培養(yǎng)。定期更換培養(yǎng)基直到貼壁生長(zhǎng)的成纖維細(xì)胞樣的細(xì)胞達(dá)到匯合。
新生兒胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞分離與原代培養(yǎng)
剝?nèi)√ケP羊膜、絨毛膜或絨毛組織，以酶消化法分離胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞，貼壁法做原代培養(yǎng)。
人類脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分離與原代培養(yǎng)
成人脂肪組織，以酶消化法分離脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，貼壁法做原代培養(yǎng)。
人類牙髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離與原代培養(yǎng)
牙齒樣本，完整剝離牙髓，以酶消化法分離牙髓間充質(zhì)干細(xì)胞，貼壁法做原代培養(yǎng)。
人類骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離與原代培養(yǎng)
人骨髓液樣本，以密度梯度離心法分離骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，貼壁法作原代培養(yǎng)。
人類宮內(nèi)膜間充質(zhì)干細(xì)胞分離與原代培養(yǎng)
宮內(nèi)膜組織樣本以酶消化法分離子宮內(nèi)膜干細(xì)胞，并做原代培養(yǎng)。或
人羊水來源間充質(zhì)干細(xì)胞分離與原代培養(yǎng)
人羊水樣本，100 目濾器過濾后離心，棄上清。以培養(yǎng)液重懸細(xì)胞沉淀，貼壁法培養(yǎng)。
定期更換培養(yǎng)基直到貼壁生長(zhǎng)的成纖維細(xì)胞樣的細(xì)胞達(dá)到匯合。
人類母乳來源間充質(zhì)干細(xì)胞分離與原代培養(yǎng)
人類母乳樣本，100 目濾器過濾后離心，棄上清。以培養(yǎng)液重懸細(xì)胞沉淀，貼壁法培養(yǎng)。定期更換培養(yǎng)基直到貼壁生長(zhǎng)的成纖維細(xì)胞樣的細(xì)胞達(dá)到匯合。
人類滑膜來源間充質(zhì)干細(xì)胞分離與原代培養(yǎng)
人類滑膜組織樣本，以酶消化法分離滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞。離心洗滌后，貼壁法培養(yǎng)。定期更換培養(yǎng)基直到貼壁生長(zhǎng)的成纖維細(xì)胞樣的細(xì)胞達(dá)到匯合。
參考文獻(xiàn)
1 FENG-JUAN LV et al.Concise Review: The Surface Markers and Identity of Human Mesenchymal Stem Cells.2014.
2 Marcin Majka et al.Concise Review: Mesenchymal Stem Cells in Cardiovascular Regeneration: Emerging Research Directions and Clinical Applications.2017.
3 C. ThomasVangsness Jr. et al.Umbilical Cord Tissue Offers the Greatest Number of Harvestable Mesenchymal Stem Cells for Research and Clinical Application: A Literature Review of Different Harvest Sites.2015.
4 Dolly Mushahary et al.Isolation, C*tion, and Characterization of Human Mesenchymal Stem Cells.2017.
5 SZDB/Z 126 2015《人類間充質(zhì)干細(xì)胞庫(kù)建設(shè)與管理規(guī)范》
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