質(zhì)量差的蛋白轉(zhuǎn)印在免疫印跡的過程中會導(dǎo)致要么比較弱的信號要么沒有信號. 盡管質(zhì)量差的蛋白轉(zhuǎn)印時有發(fā)生，科學家們通常不把它作為一個免疫印跡實驗失敗的原因。因此，當需要排除質(zhì)量差的信號的原因時轉(zhuǎn)膜的質(zhì)量好壞需要首先被考慮.
導(dǎo)致轉(zhuǎn)膜差的原因
質(zhì)量差的蛋白轉(zhuǎn)印可能發(fā)生在抗原水平低的情況下。這種情況的發(fā)生通常是因為要么轉(zhuǎn)膜步驟差或膠沒有足夠的裝載. 在實驗室中，這在免疫印跡中會作為錯誤發(fā)生從而導(dǎo)致信號的缺失。為了使轉(zhuǎn)印成功膜需要有更高水平的抗原.也會有轉(zhuǎn)印膜自己的問題或者操作時間長短，因為蛋白轉(zhuǎn)印或許需要更長時間取決于實驗人員使用的產(chǎn)品. 如果一個蛋白轉(zhuǎn)印被中斷或者沒有給與足夠的時間, 那么轉(zhuǎn)印或許不能產(chǎn)生足夠強度的信號。
另外一個導(dǎo)致質(zhì)量差轉(zhuǎn)膜的原因是抗體濃度。如果濃度太高或太低, 那么會有很少或者沒有信號的轉(zhuǎn)移。 你可以分辨出濃度是否太高因為棕色/ 微黃色的條帶會在膜上出現(xiàn)被捕獲的氣泡會提供一個天然屏障對于蛋白轉(zhuǎn)印，這會導(dǎo)致膜和轉(zhuǎn)印的區(qū)域是空白的。在真正印跡的過程中很難識別這些捕獲的氣泡, 這會導(dǎo)致印跡的失敗而沒有任何物理的暗示為什么會失敗。
阻止和檢測質(zhì)量差的蛋白轉(zhuǎn)印
因為蛋白轉(zhuǎn)印經(jīng)常被忽視, 實驗室人員或許想要整合蛋白確認的過程. 蛋白轉(zhuǎn)印可以通過使用反向染色來進行確認，這會發(fā)現(xiàn)任何特定性的問題比如大氣泡這些氣泡會阻止某些區(qū)域不能得到轉(zhuǎn)印。
有很少的方法可以解決氣泡問題. 反而，較好的方法是檢測印跡來看是否有氣泡。不進行染色的話， 大大部分氣泡不會被注意到從而導(dǎo)致最終信號的缺失。
除了染色的方法之外，也有其他的產(chǎn)品，比如 Swift Transfer Pads, 它可以用于降低必要的蛋白的轉(zhuǎn)膜時間阻止?jié)撛诘膯栴}發(fā)生，比如過熱. 他會降低蛋白轉(zhuǎn)膜不*的比率。Swift Transfer Pads可以用于任何類型的蛋白，但是對于特別高分子量的蛋白轉(zhuǎn)膜很有幫助。有高分子量的蛋白或許需要更長的轉(zhuǎn)膜時間同時有很大的可能得到質(zhì)量差的轉(zhuǎn)膜結(jié)果。低分子量的蛋白將更加容易的通過膜孔徑。
實驗人員或許使用包含20%甲醇的轉(zhuǎn)膜緩沖液來進一步協(xié)助轉(zhuǎn)膜。如果轉(zhuǎn)膜持續(xù)失敗，那么操作的時間本身會有一些問題。
質(zhì)量差的蛋白轉(zhuǎn)膜如果使用正確的技術(shù)可以相對容易找到問題并解決它。G-Biosciences有一系列的產(chǎn)品可以為科研人員在轉(zhuǎn)膜和免疫印跡過程中提供更好的準確性和操作速度。通過保證合適的蛋白轉(zhuǎn)膜，很多實驗室可以顯著降低浪費在印跡和troubleshooting印跡結(jié)果上的時間。
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