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 產(chǎn)品名稱(chēng)： Cell Counting Kit-8（CCK-8試劑盒） 細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒

保存條件：4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存兩年有效。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

1.  Cell Counting Kit-8簡(jiǎn)稱(chēng)CCK-8試劑盒，是一種基于WST-8的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒。

2.  CCK-8試劑中含有WST–8：化學(xué)名：2-（2-甲氧基-4-硝基苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-（2,4-二磺酸苯）-2H-四唑單鈉鹽]，它在電子載體的作用下被細(xì)胞線(xiàn)粒體中的一些脫氫酶還原生成橙黃色的formazan。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線(xiàn)性關(guān)系。

3.  WST-8是MTT的一種升級(jí)替代產(chǎn)品，和MTT或其它MTT類(lèi)似產(chǎn)品如XTT、MTS等相比有明顯的優(yōu)點(diǎn)。首先，MTT被線(xiàn)粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液來(lái)溶解；而WST-8和XTT、MTS產(chǎn)生的formazan都是水溶性的，可以省去后續(xù)的溶解步驟。其次，WST-8產(chǎn)生的formazan比XTT和MTS產(chǎn)生的formazan更易溶解。再次，WST-8比XTT和MTS更加穩(wěn)定，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加穩(wěn)定。另外，WST-8和MTT、XTT等相比線(xiàn)性范圍更寬，靈敏度更高。

4.  WST-8和WST-1相比，檢測(cè)靈敏度更高，更易溶解，并且更加穩(wěn)定。

5.  本試劑盒可以用于細(xì)胞因子等誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖檢測(cè)，也可以用于抗癌藥物等對(duì)細(xì)胞有毒試劑誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性檢測(cè)，或一些藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制檢測(cè)。

6.  本試劑盒檢測(cè)非常便捷。試劑盒僅一管已經(jīng)配制好的含有WST-8的CCK-8溶液，無(wú)須再進(jìn)行任何配制等操作。無(wú)須使用同位素，所有的檢測(cè)步驟僅在同一塊96孔板內(nèi)完成。不必洗滌細(xì)胞，不必收集細(xì)胞，也不必采用額外的步驟去溶解formazan。可以用于大批量樣品的檢測(cè)。

7.  酚紅和血清對(duì)本試劑盒的測(cè)定無(wú)明顯影響。

8.  WST-8對(duì)細(xì)胞無(wú)明顯毒性。加入WST-8顯色后，可以在不同時(shí)間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀板，使檢測(cè)時(shí)間更加靈活，便于找到*測(cè)定時(shí)間。

使用說(shuō)明：

1.  收集對(duì)數(shù)期細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，每孔加入100ul,鋪板使待測(cè)細(xì)胞調(diào)密度至1000-10000孔，（邊緣孔用無(wú)菌PBS填充）。

2.  5%CO2，37℃孵育，至細(xì)胞單層鋪滿(mǎn)孔底（96孔平底板，具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。加入濃度梯度的藥物，原則上，細(xì)胞貼壁后即可加藥，或兩小時(shí)，或半天時(shí)間，每孔0-10ul，設(shè)3-5個(gè)復(fù)孔.建議設(shè)5個(gè)。

3.  每孔加入10微升CCK-8溶液。如果起始的培養(yǎng)體積為200微升，則需加入20微升CCK-8溶液，其它情況以此類(lèi)推?？梢杂眉恿讼鄳?yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液和CCK-8溶液但沒(méi)有加入細(xì)胞的孔作為空白對(duì)照。如果擔(dān)心所使用的藥物會(huì)干擾檢測(cè)，需設(shè)置加了相應(yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液、藥物和CCK-8溶液但沒(méi)有加入細(xì)胞的孔作為空白對(duì)照。

4.  在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育0.5-4小時(shí)，對(duì)于大多數(shù)情況孵育1小時(shí)就可以了。時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類(lèi)型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定，初次實(shí)驗(yàn)時(shí)可以在0.5、1、2和4小時(shí)后分別用酶標(biāo)儀檢測(cè)，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個(gè)時(shí)間點(diǎn)用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

5.  在450nm測(cè)定吸光度。如無(wú)450nm濾光片，可以使用420-480nm的濾光片。可以使用大于600nm的波長(zhǎng)，例如650nm，作為參考波長(zhǎng)進(jìn)行雙波長(zhǎng)測(cè)定。

注意事項(xiàng)：

1.  由于使用96孔板進(jìn)行檢測(cè)，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，一定要注意蒸發(fā)的問(wèn)題。一方面，由于96孔板周?chē)蝗ui容易蒸發(fā)，可以采取棄用周?chē)蝗Φ霓k法，改加PBS，水或培養(yǎng)液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方，以緩解蒸發(fā)。

2.  本試劑盒的檢測(cè)依賴(lài)于脫氫酶催化的反應(yīng)，如果待檢測(cè)體系中存在較多的還原劑，例如一些抗氧化劑會(huì)干擾檢測(cè)，需設(shè)法去除。

3.  用酶標(biāo)儀檢測(cè)前需確保每個(gè)孔內(nèi)沒(méi)有氣泡，否則會(huì)干擾測(cè)定。

4.  使用時(shí)帶那種透明的簿膜手套。