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Annexin V/PI法：

Annexin V/PI法是目前較為流行的檢測(cè)細(xì)胞凋亡的方法。AnnexinV是一種鈣依賴性的磷脂結(jié)合蛋白，對(duì)磷脂酰絲氨酸（phosphatidyl-serine,PS）具有較高的親和性，它可以較為敏感的檢測(cè)細(xì)胞膜表面的翻轉(zhuǎn)的PS。將Annexin-V進(jìn)行熒光素（FITC、PE）標(biāo)記，以標(biāo)記的

Annexin-V作為熒光探針，利用流式細(xì)胞或熒光顯微鏡可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。該方法快速可靠，不需要固定細(xì)胞，從而避免了Tunel法因固定而出現(xiàn)的DNA丟失。 Annexin V/PI法是目前較為理想的檢測(cè)細(xì)胞凋亡的方法，缺點(diǎn)是細(xì)胞膜的改變持續(xù)時(shí)間有限，選擇檢測(cè)的

時(shí)機(jī)很重要。該方法用于細(xì)胞的早期凋亡檢測(cè)。

Tunnel 檢測(cè)法

細(xì)胞凋亡中斷裂的DNA鏈會(huì)產(chǎn)生大量的3 -OH末端，把脫氧核糖核苷酸轉(zhuǎn)移酶（TdT）和生物素或地高辛標(biāo)記的dUTP放在一起溫育，TdT將標(biāo)記的dUTP連接到凋亡細(xì)胞的DNA3’ -OH末端，然后再用熒光染料標(biāo)記的生物素或地高辛抗體作為二抗進(jìn)行反應(yīng)，這樣就可以使產(chǎn)生DNA斷裂的凋亡細(xì)胞標(biāo)記有熒光。正常細(xì)胞幾乎沒有DNA斷裂，很少能夠被染色，而凋亡細(xì)胞則顯色。但Tunel法也有局限性，如：組織固定、處理的過(guò)程本身

會(huì)改變檢測(cè)結(jié)果，對(duì)細(xì)胞凋亡不是特異性的，壞死細(xì)胞液會(huì)被標(biāo)記。盡管如此，Tunnel 法在體外原位檢測(cè)方面顯示出*性，被廣泛應(yīng)用。該方法用于細(xì)胞晚期凋亡檢測(cè)。

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