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          北京博蕾德科技發(fā)展有限公...

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          博蕾德實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)指南

          閱讀:1254      發(fā)布時間:2015-1-30
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          Western Blot 實(shí)驗(yàn)服務(wù)檢測

          樣品處理及保存

          1)懸浮細(xì)胞樣品:

           把細(xì)胞及培養(yǎng)液一起收集到15ml或者50ml離心管中,1500rpm離心3min,棄去上清;加入PBS輕輕吹打,1500rpm離心3min,棄去上清;反復(fù)3次,棄去上清后于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況一般保存1年,建議盡快檢測。

          2)貼壁細(xì)胞樣品

          • 胰酶消化:用胰酶將細(xì)胞消化后,收集到15ml或者50ml離心管中,1500rpm離心3min,棄去上清;加入PBS輕輕吹打,1500rpm離心3min,棄去上清;反復(fù)3次,棄去上清后于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況一般保存1年,建議盡快檢測。
          • 細(xì)胞刮子收集細(xì)胞:對于某些蛋白(即對胰酶比較敏感或者實(shí)驗(yàn)特殊要求,如E-Cadherin不易用胰酶消化后進(jìn)行WB檢測),直接用細(xì)胞刮子刮下細(xì)胞,收集到EP15ml或者50ml離心管中,1500rpm離心3min,棄去上清;加入PBS輕輕吹打,1500rpm離心3min,棄去上清;反復(fù)3次,棄去上清后于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況一般保存1年,建議盡快檢測。

          3)動物組織樣品:

              取下合適的動物或者人的組織樣品后用預(yù)冷的PBS或者生理鹽水漂洗,盡量除盡殘留血液,用濾紙把多余PBS吸取干凈。把組織分成約50mg大?。ㄒ罁?jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康男枰M(jìn)行調(diào)整),用錫紙分別包裝好或者用凍存管裝好,于-80度或者液氮中保存。在避免凍融的情況一般保存1年,建議盡快檢測。

          4)植物樣品:

              取得待測植物樣品后,用蒸餾水把泥土漂洗干凈,用濾紙把多余水分吸取干凈,分裝成合適大小于-80度或者液氮中保存。在避免凍融的情況一般保存1年,建議盡快檢測。

          5)細(xì)菌樣品:

          細(xì)菌培養(yǎng)完成后,10000rpm離心5min收集細(xì)菌,加入PBS吹打,10000rpm離心5min,棄去上清;反復(fù)3次,棄去上清后于-80度或者液氮凍存待用。

          客戶提供資料

          • 新鮮或正確保存的樣品:細(xì)胞>1×107;組織>30mg;細(xì)菌濕重>1mg;植物>100mg;血清>50ul等;樣品蛋白濃度>1mg/ml,蛋白量>200ug/樣品。
          • 若要檢測磷酸化蛋白,請在3個月內(nèi)進(jìn)行。長時間保存樣品容易使磷酸化蛋白去磷酸化而檢測不到磷酸化條帶。
          • 提取胞漿、胞核蛋白的樣品應(yīng)盡量采用新鮮樣品,凍存樣品提取的胞核蛋白可能會減少。
          • 目的蛋白一抗,我公司可代購。
          • 陽性對照樣品(盡量提供);

          結(jié)果提供

          • 預(yù)實(shí)驗(yàn)曝光結(jié)果(膠片及掃描圖),預(yù)實(shí)驗(yàn)采取一至兩個一抗稀釋度;
          • 正式實(shí)驗(yàn)曝光結(jié)果(膠片及掃描圖);
          • 完整實(shí)驗(yàn)報告;
          • OD值分析報告(可選)。

          收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)

          以每張膜8個樣本收費(fèi),不足8個樣本按8個樣本收費(fèi),歡迎詢價詳談。



          ELISA 實(shí)驗(yàn)服務(wù)檢測


          樣品處理及保存
           1血清:
               室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
           2血漿:
              應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
           3尿液:
              用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
           4細(xì)胞培養(yǎng)上清:
              A、檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/ 分)。仔細(xì)收集上清。
              B、檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBSPH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并 放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
            5組織標(biāo)本:
              切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8的溫度。加入一定量的細(xì)胞/組織裂解液,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

          客戶提供資料

          • 提供液體類標(biāo)本(血清、血漿、尿液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等)和組織標(biāo)本。(注:當(dāng)天收集待檢測的標(biāo)本,儲存于4;周期收集樣本待檢測的標(biāo)本,保存于-70,避免反復(fù)凍融)。
          • ELISA 試劑盒

          結(jié)果提供

          詳細(xì)實(shí)驗(yàn)流程(包括標(biāo)準(zhǔn)曲線、樣品的吸光值、濃度等),保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確、客觀、可信,但不能確保一定要得到某特定結(jié)果。

          實(shí)驗(yàn)費(fèi)用及時間:

          根據(jù)樣品數(shù)目進(jìn)行報價(具體事宜請咨詢)。ELISA實(shí)驗(yàn)一般3-5個工作日。



          流式細(xì)胞術(shù)檢測服務(wù)


          樣品制備參考:

          A.     直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體):
          (1) 收集1×106個細(xì)胞,800rpm離心5min4以上冷PBS洗一次。
          (2) 4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
          (3) 1ml5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個細(xì)胞/20ul抗體)PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
          (4) 用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。

          B.     未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法
          (1) 收集2×106個細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
          (2) 2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
          (3) 1ml0.2%Triton-X1005%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
          (4) 加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
          (5) 加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
          (6) 加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測。
          (7) 流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。
          C.細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
          (1) 待測樣本制成單細(xì)胞懸液,然后2000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘,棄上清。
          (2) 4預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4保存,至少固定18小時。
          (3) 調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
          (4) PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
          注:本方法僅供參考,如有其它要求,請在送樣前說明

          客戶提供:
          1) 單個細(xì)胞:1~2×106 個細(xì)胞左右;來源于人、小鼠、大鼠或其它。

          2)外周血:EDTA或肝素抗凝全血,5ml左右;來源于人、小鼠、大鼠或其它

          3)抗體(熒光素標(biāo)記)或檢測試劑盒

          結(jié)果提供

          l實(shí)驗(yàn)方法、步驟、所用試劑、儀器等。

          流式實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

          實(shí)驗(yàn)費(fèi)用及時間:

          根據(jù)樣品數(shù)目和檢測項(xiàng)目進(jìn)行報價(具體事宜請咨詢)。流式實(shí)驗(yàn)一般為3-5個工作日。

          產(chǎn)品展示

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