Western Blot 實(shí)驗(yàn)服務(wù)檢測
樣品處理及保存
1)懸浮細(xì)胞樣品:
把細(xì)胞及培養(yǎng)液一起收集到15ml或者50ml離心管中,1500rpm離心3min,棄去上清;加入PBS輕輕吹打,1500rpm離心3min,棄去上清;反復(fù)3次,棄去上清后于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況一般保存1年,建議盡快檢測。
2)貼壁細(xì)胞樣品
3)動物組織樣品:
取下合適的動物或者人的組織樣品后用預(yù)冷的PBS或者生理鹽水漂洗,盡量除盡殘留血液,用濾紙把多余PBS吸取干凈。把組織分成約50mg大?。ㄒ罁?jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康男枰M(jìn)行調(diào)整),用錫紙分別包裝好或者用凍存管裝好,于-80度或者液氮中保存。在避免凍融的情況一般保存1年,建議盡快檢測。
4)植物樣品:
取得待測植物樣品后,用蒸餾水把泥土漂洗干凈,用濾紙把多余水分吸取干凈,分裝成合適大小于-80度或者液氮中保存。在避免凍融的情況一般保存1年,建議盡快檢測。
5)細(xì)菌樣品:
細(xì)菌培養(yǎng)完成后,10000rpm離心5min收集細(xì)菌,加入PBS吹打,10000rpm離心5min,棄去上清;反復(fù)3次,棄去上清后于-80度或者液氮凍存待用。
客戶提供資料
結(jié)果提供
收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)
以每張膜8個樣本收費(fèi),不足8個樣本按8個樣本收費(fèi),歡迎詢價詳談。
ELISA 實(shí)驗(yàn)服務(wù)檢測
樣品處理及保存
1)血清:
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
A、檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/ 分)。仔細(xì)收集上清。
B、檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并 放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
5)組織標(biāo)本:
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的細(xì)胞/組織裂解液,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
客戶提供資料
結(jié)果提供
詳細(xì)實(shí)驗(yàn)流程(包括標(biāo)準(zhǔn)曲線、樣品的吸光值、濃度等),保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確、客觀、可信,但不能確保一定要得到某特定結(jié)果。
實(shí)驗(yàn)費(fèi)用及時間:
根據(jù)樣品數(shù)目進(jìn)行報價(具體事宜請咨詢)。ELISA實(shí)驗(yàn)一般3-5個工作日。
流式細(xì)胞術(shù)檢測服務(wù)
樣品制備參考:
A. 直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體):
(1) 收集1×106個細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。
B. 未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1) 收集2×106個細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2) 用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3) 用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4) 加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5) 加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6) 加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測。
(7) 流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。
C.細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1) 待測樣本制成單細(xì)胞懸液,然后2000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘,棄上清。
(2) 用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存,至少固定18小時。
(3) 調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4) PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
注:本方法僅供參考,如有其它要求,請在送樣前說明
客戶提供:
1) 單個細(xì)胞:1~2×106 個細(xì)胞左右;來源于人、小鼠、大鼠或其它。
2)外周血:EDTA或肝素抗凝全血,5ml左右;來源于人、小鼠、大鼠或其它
3)抗體(熒光素標(biāo)記)或檢測試劑盒
結(jié)果提供:
l實(shí)驗(yàn)方法、步驟、所用試劑、儀器等。
流式實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
實(shí)驗(yàn)費(fèi)用及時間:
根據(jù)樣品數(shù)目和檢測項(xiàng)目進(jìn)行報價(具體事宜請咨詢)。流式實(shí)驗(yàn)一般為3-5個工作日。
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)
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