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所 在 地上海市
更新時(shí)間:2024-10-24 16:25:11瀏覽次數(shù):1036次
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細(xì)胞樣本中甘油含量檢測(cè)試劑盒
適用范圍:測(cè)定實(shí)體組織、細(xì)胞中的甘油濃度。組成 (105 次微板測(cè)定或 30 次 1 ml 比色杯測(cè)定):
(1) 裂解液 50 ml
(2) R1 試劑 16 ml
(3) R2 試劑 4 ml
(4) 4 mmol/L 甘油標(biāo)準(zhǔn)品 1 ml
4 oC,儲(chǔ)存 3 月。
所需設(shè)備:酶標(biāo)儀、生化分析儀或 721、722 型可
見(jiàn)光分光光度計(jì)。佳工作波長(zhǎng) 550nm,如無(wú)此波
長(zhǎng)建議優(yōu)先選用 570nm、次選 530、490nm。
一 組織細(xì)胞裂解
細(xì)胞(包括分化的脂肪細(xì)胞)裂解: 消化、離心收集細(xì)胞?;蛑苯釉谂囵B(yǎng)皿內(nèi)裂解。通常6孔板單孔約2x106個(gè)細(xì)胞,75cm2瓶約1x107細(xì)胞。按比例每 1~2 x 106細(xì)胞加 0.1ml 裂解液,混勻,靜置 10 分鐘。
動(dòng)物組織裂解:
切記要預(yù)先將新鮮組織切稱(chēng)重后再進(jìn)行保存。組織凍存后再進(jìn)行解凍、剪切、稱(chēng)重可能會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的測(cè)量誤差。離心管精確稱(chēng)重,加入組織塊后再稱(chēng)重,二者相減(即減量稱(chēng)重法)計(jì)算組織量(約 100mg)。強(qiáng)烈建議按比例每 1mg 組織加10µl裂解液以減少樣品間蛋白和脂質(zhì)含量變異而產(chǎn)生的誤差。(注意;裂解液用量在 1ml 或更多可保證有效的裂解與脂質(zhì)提?。?。用電動(dòng)高速勻漿器或手動(dòng)玻璃勻漿器破碎組織。(不推薦超聲方法,因其不能*和均勻破碎。應(yīng)根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)調(diào)整初始的組織細(xì)胞加入量),而后,靜置 10 分鐘。
二. 裂解液處理:
1. 取適量上清液轉(zhuǎn)移到 1.5ml 離心管中,進(jìn)行步驟
2 的操作。余下的裂解液可用 BCA 法蛋白定量試劑盒進(jìn)行蛋白定量或-20oC 儲(chǔ)存。
2. 70oC 加熱 10 分鐘滅活脂肪酶,可能出現(xiàn)絮狀沉淀。
3. 室溫 5000rpm 離心 5 分鐘,上層清液即可用于酶學(xué)測(cè)定。
三 工作溶液配制:按 4:1 比例,取 4 ml 試劑 R1 與1 ml 試劑 R2 混合即可,立即使用或 4oC 保存<1 天,變色棄去。(注意:謹(jǐn)防來(lái)源不明但容易發(fā)生的甘油污染,可來(lái)自操作者本人或標(biāo)準(zhǔn)品液體微粒濺射等。)
細(xì)胞樣本中甘油含量檢測(cè)試劑盒
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