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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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11405ES60輝光型雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒
| 參考價: | 面議 |
具體成交價以合同協(xié)議為準- 11405ES60 產(chǎn)品型號
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：547更新時間：2022-04-03 17:38:20
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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 11405ES60 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號 | 規(guī)格 | 價格（元） | *（元） |
Dual Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit | 11405ES60 | 100 T | 1655.00 | 1155.00 |
Dual Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit | 11405ES80 | 1000 T | 8365.00 | 5855.00 |
產(chǎn)品描述
螢火蟲螢光素酶（Firefly luciferase）是一種分子量約為61 kDa的蛋白，在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，能夠催化螢光素（luciferin）氧化成oxyluciferin，在氧化的過程中會發(fā)出波長為560 nm左右的生物螢光。海腎螢光素酶（Renilla luciferase）是一種分子量約為36 kDa的蛋白，在氧氣存在的條件下，可以催化腔腸素（coelenterazine）氧化成coelenteramide，在氧化的過程中會發(fā)出波長為480nm左右的生物螢光。兩種生物螢光都可通過化學(xué)發(fā)光儀進行測定。檢測原理如圖所示：
圖1：螢火蟲和海腎螢光素酶檢測原理圖
Dual Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit是一種輝光型雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒，具有高靈敏度和發(fā)光信號穩(wěn)定的特點。本試劑盒中含有高純度的螢火蟲螢光素和腔腸素，在同一個樣品中先以螢火蟲螢光素為底物檢測螢火蟲螢光素酶，后淬滅螢火蟲螢光素酶的螢光信號，并同時以腔腸素為底物檢測海腎螢光素酶，實現(xiàn)雙螢光素酶報告基因檢測。海腎螢光素酶作為內(nèi)參，消除了因孔間細胞數(shù)量、轉(zhuǎn)染效率不同等造成的影響，使得檢測結(jié)果的準確性更高。
相對于閃光型Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit（Cat 11402），本品具有以下優(yōu)點：1）發(fā)光信號更穩(wěn)定性，為實驗設(shè)計提供了更大的靈活性。2）更符合高通量檢測，無需依賴自動進樣器，并且無需棄培養(yǎng)液、離心等步驟，大大的簡化了實驗流程。3）無明顯刺激性氣味。本試劑盒可用于多種常用細胞培養(yǎng)液：RPMI 1640、DMEM 、MEM-α、F12、DMEM/F12等，其半衰期均為2h左右（22℃），滿足絕大多數(shù)高通量實驗需求。
產(chǎn)品組分
組分編號 | 組分名稱 | 產(chǎn)品編號/規(guī)格 | |
11405ES60（100 T） | 11405ES80（1000 T） | ||
11405-A | D-輝光型螢火蟲螢光素酶緩沖液 | 10 mL | 100 mL |
11405-B | D-輝光型螢火蟲螢光素酶底物 | 1 vial | 1 viaL |
11405-C | D-輝光型海腎螢光素酶緩沖液 | 10 mL | 100 mL |
11405-D | D-輝光型海腎螢光素酶底物(100×) | 100 μL | 1 mL |
運輸與保存方式
干冰運輸。未拆封試劑盒-20℃保存，有效期1年。
溶解分裝后的D-輝光型螢火蟲和海腎螢光素酶底物于-70℃避光保存1年，或-20℃短期保存不超過1個月。
使用說明
1.需自備的材料
單/多道移液器；不透光細胞培養(yǎng)白板；化學(xué)發(fā)光儀或帶化學(xué)發(fā)光檢測模塊的酶標儀。
2.檢測試劑準備
1）螢火蟲螢光素酶檢測試劑：使用時將D-輝光型螢火蟲螢光素酶緩沖液一次性全部倒入D-輝光型螢火蟲螢光素酶底物瓶中，充分混勻直至底物*溶解。按使用需求分裝，建議-70℃長期保存或-20℃保存不超過一個月。
2）海腎螢光素酶檢測試劑：根據(jù)實際使用量，以100:1的比例將適量的D-輝光型海腎螢光素酶緩沖液與D-輝光型海腎螢光素酶底物(100×) 混勻，室溫避光備用（例如：如果需要100 mL緩沖液，則需要加入1 mL的底物），建議現(xiàn)配現(xiàn)用。
注：1）兩種緩沖液都可以4℃，室溫或水浴融化，但溫度不能超過25℃。
2）D-輝光型海腎螢光素酶底物(100×)，每次開蓋前需進行短暫低速離心。
3.操作步驟
1）從細胞培養(yǎng)箱中取出含哺乳動物細胞的培養(yǎng)板，放置5-15 min，平衡至室溫。
2）螢火蟲螢光素酶活性檢測：
①加入與待測細胞培養(yǎng)液等體積并平衡至室溫的螢火蟲螢光素酶檢測試劑（例如，96孔板建議加入80 μl培養(yǎng)液，相應(yīng)加入80 μl檢測試劑；384孔板通常加入20 μl培養(yǎng)液，相應(yīng)加入20 μl檢測試劑）。
②在水平搖床上室溫混勻至少10 min。（注：不要用移液器吹吸混勻，產(chǎn)生的氣泡會影響發(fā)光檢測讀數(shù)。）
③在化學(xué)發(fā)光檢測儀或帶化學(xué)發(fā)光模塊的多功能酶標儀上檢測螢火蟲螢光素酶發(fā)光信號，加入檢測試劑后2 h內(nèi)完成檢測。
3）海腎螢光素酶活性檢測：
①加入平衡至室溫的海腎螢光素酶檢測試劑，加樣體積與初始細胞培養(yǎng)液體積相同并充分混勻。（例如，96孔板建議加入80 μl培養(yǎng)液，相應(yīng)加入80 μl檢測試劑；384孔板通常加入20 μl培養(yǎng)液，相應(yīng)加入20 μl檢測試劑）。
②在水平搖床上室溫混勻至少10 min。
③在化學(xué)發(fā)光檢測儀或帶化學(xué)發(fā)光模塊的多功能酶標儀上檢測海腎螢光素酶發(fā)光信號，加入檢測試劑后2 h內(nèi)完成檢測。海腎螢光素酶在微孔板上的檢測順序應(yīng)與螢火蟲螢光素酶的檢測順序相同。
4）數(shù)據(jù)分析：
①實驗設(shè)計：根據(jù)不同實驗?zāi)康?，在每個培養(yǎng)板中都應(yīng)設(shè)置空白對照組，實驗組和對照組。
a.空白對照組
背景F：未轉(zhuǎn)染細胞+螢火蟲螢光素酶檢測試劑。
背景R：未轉(zhuǎn)染細胞+螢火蟲螢光素酶檢測試劑+海腎螢光素酶檢測試劑。
注：用于空白對照組樣品量必須與實驗樣品量相同，并且包含與實驗樣品相同的培養(yǎng)基/血清組合。
b.實驗組：轉(zhuǎn)染細胞經(jīng)實驗化合物處理(即實驗組F和實驗組R)。
c.對照組：轉(zhuǎn)染細胞不經(jīng)處理，用以標準化結(jié)果(即對照組F和對照組R)。
②計算結(jié)果：實驗組比值=(實驗組F-背景F）/(實驗組R-背景R)，對照組比值=(對照組F-背景F）/(對照組R-背景R)。
表達倍數(shù)=實驗組比值/對照組比值。
注意事項
1）反應(yīng)溫度：酶促反應(yīng)對溫度較為敏感，加樣檢測前務(wù)必將檢測試劑以及細胞培養(yǎng)液平衡至室溫（20-25℃）。
2）檢測儀器：能檢測化學(xué)發(fā)光的儀器都適用，但由于不同儀器的設(shè)置和靈敏度不同，測得的光信號值也會不同。
3）檢測板：為防止孔間干擾，推薦使用不透光細胞培養(yǎng)白板。
4）檢測設(shè)置：Luminescence，350-700 nm，建議讀板時間設(shè)為0.5-1 sec。
5）發(fā)光信號會受到檢測環(huán)境如培養(yǎng)基組分、溫度等影響，應(yīng)確保同組內(nèi)不同樣本檢測條件一致。
6）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套。
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
Luciferase Reporter Gene Assay Kit 螢火蟲螢光素酶報告基因檢測試劑盒 | 11401ES60/76/80 | 100/500/1000T |
Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit 雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒HOT | 11402ES60/80 | 100/1000T |
Firefly Glo Luciferase Reporter Gene Assay kit 輝光型螢火蟲螢光素酶報告基因檢測試劑盒HOT | 11404ES60/80 | 100/1000T |
pGM-CMV Luciferase Reporter Plasmid Positive Control pGM-CMV-Luc螢光素酶報告基因質(zhì)粒陽性對照 | 11556ES03 | 1μg |
Luciferase Reporter Plasmid negative control （螢光素酶報告基因質(zhì)粒陰性對照） | 11555ES03 | 1μg |
pGMLR-CMV Luciferase Reporter Plasmid（pGMLR-CMV海腎螢光素酶報告基因質(zhì)粒） | 11558ES03 | 1μg |
Hieff Clone® Plus One Step Cloning Kit 一步法快速克隆試劑盒 | 10911ES20 | 20T |
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix高保真酶預(yù)混液 | 10149ES08 | 5ml |
DH5α Chemically Competent Cell DH5α化學(xué)感受態(tài)細胞 | 11802ES80 | 10×100μl |
Fetal Bovine Serum Origin South America Gold胎牛血清（南美特級） | 40130ES76 | 500ml |
Hieff TransTM Liposomal Transfection Reagent脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑 | 40802ES03 | 1ml |
HB220325
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