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參考價(jià): | 面議 |
- 10299ES40 產(chǎn)品型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問(wèn)次數(shù):895更新時(shí)間:2022-02-09 15:28:40
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- www.yeasen.com
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 40000 U |
---|---|---|---|
貨號(hào) | 10299ES40 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
主要用途 | NGS建庫(kù) |
Hieff® Fast T4 DNA Ligase (400 U/µL)
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格(元) |
Hieff® Fast T4 DNA Ligase (400 U/µL) | 10299ES40 | 40000 U | 983.00 |
產(chǎn)品描述
Hieff® Fast T4 DNA Ligase是一款可用于NGS建庫(kù)過(guò)程中DNA///片段和接頭連接的單酶產(chǎn)品,該產(chǎn)品已經(jīng)過(guò)高通量測(cè)序驗(yàn)證,質(zhì)量?jī)?yōu)異。本酶具有高效的連接能力,非常適合復(fù)雜結(jié)構(gòu)核酸片段的連接,比如華大平臺(tái)的Ω接頭。對(duì)于無(wú)需進(jìn)行體系調(diào)整的客戶,推薦選購(gòu)Hieff NGS® Ultima DNA Ligation Module (Cat#12604),其核心組分即為本品。
產(chǎn)品組分
組分編號(hào) | 組分名稱 | 規(guī)格 |
10299-A | Hieff® Fast T4 DNA Ligase (400 U/µL) | 100 µL |
10299-B | 10 × T4 DNA Ligase Buffer | 250 μL |
運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸。-20℃保存,有效期2年。
單位定義
在20 μL的連接反應(yīng)體系中,6 μg的λDNA-Hind Ⅲ分解物在16℃下反應(yīng)30 min時(shí),催化50%以上的DNA///片段發(fā)生連接所需要的酶量定義為1個(gè)活性單位(U)。
質(zhì)量控制
核酸外切酶殘留檢測(cè):2000 U的本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在37℃下反應(yīng)4小時(shí),DNA的電泳譜帶不發(fā)生變化。
核酸內(nèi)切酶殘留檢測(cè):2000 U的本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在37℃下反應(yīng)4小時(shí),DNA電泳譜帶不發(fā)生變化。
注意事項(xiàng)
1)Buffer在融解時(shí),如果出現(xiàn)少量沉淀屬正常現(xiàn)象,請(qǐng)顛倒混勻后使用。
2)為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用方法
1. 目前主流的合并法DNA建庫(kù)試劑盒,其末端修復(fù)和加A處理后一般不純化,直接進(jìn)行接頭連接。本試劑盒可與主流的商業(yè)化末端修復(fù)加A體系兼容,進(jìn)行接頭連接。反應(yīng)體系請(qǐng)參考如下配制,渦旋瞬離后置于20℃,反應(yīng)15 min即可。
表1 Adapter Ligation體系
名稱 | 體積(μL) |
dA-tailed DNA | 60 |
10 × T4 DNA Ligase Buffer | 10 |
50% PEG 6000 | 10* |
DNA Adapter | X** |
Hieff® Fast T4 DNA Ligase | 1-5*** |
ddH2O | To 100 |
【注】:*試劑盒內(nèi)未提供50% PEG 6000,需自行準(zhǔn)備。
**接頭用量參考表2。
***Hieff® Fast T4 DNA Ligase用量可根據(jù)需要添加1-5 μL。
2. Adapter的質(zhì)量和使用濃度直接影響連接效率及文庫(kù)產(chǎn)量。Adapter用量過(guò)高可能會(huì)產(chǎn)生較多Adapter Dimer;用量較低可能會(huì)影響連接效率及文庫(kù)產(chǎn)量。表2列舉了使用本試劑盒,不同Input DNA量推薦的Adapter使用量。
表2 500 pg-1 μg Input DNA推薦的Adapter使用濃度
Input DNA | Adapter : Input DNA摩爾比 | Input DNA | Adapter : Input DNA摩爾比 |
1 μg | 10:1 | 50 ng | 100:1 |
500 ng | 20:1 | 25 ng | 200:1 |
250 ng | 40:1 | 1 ng | 200:1 |
100 ng | 100:1 | 500 pg | 400:1 |
【注】:Input DNA摩爾數(shù)(pmol)≈ Input DNA質(zhì)量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均長(zhǎng)度(bp)]。
【接頭添加計(jì)算舉例】:當(dāng)Input DNA為100 ng,Input DNA長(zhǎng)度為300 bp時(shí),接頭應(yīng)該添加多少?
第—步,計(jì)算Input DNA摩爾數(shù)。公式:Input DNA摩爾數(shù)(pmol)≈ Input DNA質(zhì)量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均長(zhǎng)度(bp)];
Input DNA摩爾數(shù)(pmol)=100 ÷(0.66×300)=0.5 pmol;
第二步,計(jì)算接頭添加摩爾數(shù)。根據(jù)表2查詢接頭添加比例;
根據(jù)表2,查得Input DNA 100ng時(shí)接頭添加比例100:1,則接頭添加摩爾數(shù)=100×0.5 pmol=50 pmol;
第三步,計(jì)算接頭添加體積。接頭濃度=15 μmol/L(如使用其他接頭,濃度需要依據(jù)其他接頭濃度參數(shù));
接頭添加體積=接頭添加摩爾數(shù)(50 pmol)÷接頭濃度(15 μmol/L)=3.34 μL(注:15 μmol/L=15 pmol/μL)
綜上,接頭可添加3.4 μL。(注:接頭大加入體積不超過(guò)5 μL)相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格(元) |
Hieff NGS® Ultima FR DNA Library Prep Kit for Illumina | 12199ES08/24/96 | 8/24/96 T | 2553/6783/25563 |
Hieff NGS® Ultima Endprep Mix | 12605ES24/96 | 24/96 T | 4233/14333 |
Hieff NGS® Ultima DNA Ligation Module | 12604ES24/96 | 24/96 T | 3263/10863 |
Hieff NGS® FFPE DNA Repair Reagent | 12606ES24/96 | 24/96 T | 2253/7633 |
Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 1 | 12615ES04/16 | 12×4/12×16 T | 1256/4536 |
Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 2 | 12616ES04/16 | 12×4/12×16 T | 1256/4536 |
Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 3 | 12617ES04/16 | 12×4/12×16 T | 1256/4536 |
Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 4 | 12618ES04/16 | 12×4/12×16 T | 1256/4536 |
2×Super Canace® Ⅱ High-Fidelity Mix for Library Amplification | 12621ES24/96 | 24/96 T | 583/1783 |
Hieff NGS® DNA selection Beads(Superior Ampure XP alternative) | 12601ES08/56 | 5/60 mL | 986/6286 |
dsDNA HS assay kit for Qubit® | 12640ES60/76 | 100/500 T | 686/2696 |
HB200710