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2×Hieff Canace® 高保真酶預(yù)混液信息

2×Hieff Canace® 高保真酶預(yù)混液描述

2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix高保真酶預(yù)混液是即用型2×預(yù)混合溶液，包含Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase，dNTP以及優(yōu)化的緩沖體系。預(yù)混液中添加了Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase的熱啟動(dòng)因子，極大提高了擴(kuò)增的檢出率和產(chǎn)物的特異性。預(yù)混液中添加了延伸因子使得該酶具有長片段擴(kuò)增能力，擴(kuò)增目的片段的長度可長達(dá)10 kb，該酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，是普通Pfu DNA聚合酶的6倍。擴(kuò)增速度可達(dá)15 sec/kb。適用于復(fù)雜模板的擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物為平末端。

2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix具有快速簡便、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，反應(yīng)體系只需加入引物和模板即可，并可以通過兩步法的程序進(jìn)行擴(kuò)增，簡化了實(shí)驗(yàn)步驟，節(jié)省了時(shí)間。本產(chǎn)品中不含染料，PCR產(chǎn)物需加入Loading buffer后進(jìn)行電泳。另外，該產(chǎn)品還含有特異保護(hù)劑，使得預(yù)混液反復(fù)凍融后仍可維持穩(wěn)定活性。

產(chǎn)品應(yīng)用

基因克??；復(fù)雜DNA模板擴(kuò)增；高通量建庫。

運(yùn)輸與保存方法

冰袋運(yùn)輸。-20℃保存。有效期2年。

注意事項(xiàng)

1）解凍后Master Mix可能出現(xiàn)晶體沉淀，使用前務(wù)必渦旋振蕩混勻至沉淀消失，不影響試劑性能。

2）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。

3）本產(chǎn)品僅作科研用途！

推薦PCR反應(yīng)體系（冰上配制）

【注】：

1）聚合酶終濃度：在1×預(yù)混液含有1 U/50 μL的聚合酶。
2）引物：PCR反應(yīng)體系中引物終濃度的范圍為0.2-1 μM，推薦0.5 μM。
3）Mg2+、dNTP終濃度：在1×預(yù)混液含有1.5 mM Mg2+和200 μM的dNTP。
4）不同模板的推薦使用量（50 μL反應(yīng)體系）：

PCR擴(kuò)增程序：有以下三種程序可選擇，優(yōu)先選擇兩步法程序。

兩步法程序（優(yōu)先推薦）：                          

三步法程序（常規(guī)程序）：

梯度溫度退火程序（難擴(kuò)增基因推薦程序）:        

【注】：

1）預(yù)變性溫度和時(shí)間：推薦溫度：98℃，時(shí)間：3 min，高GC含量模板5-10 min。
2）退火溫度和時(shí)間：推薦溫度：60℃，也可根據(jù)需要，設(shè)立溫度梯度去摸索引物退火的最適溫度。推薦退火時(shí)間設(shè)置為20 sec，可以在10-30 sec內(nèi)調(diào)節(jié)。退火時(shí)間太長可能導(dǎo)致擴(kuò)增產(chǎn)物在膠上呈彌散狀。
3）延伸溫度和時(shí)間：推薦溫度：72℃。時(shí)間：30 sec/kb，復(fù)雜模板根據(jù)實(shí)際情況可延長至60 sec/kb。
4）擴(kuò)增產(chǎn)物：請(qǐng)將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物放置于-20℃保存，防止該酶降解擴(kuò)增產(chǎn)物。擴(kuò)增產(chǎn)物為平末端。
5）不同擴(kuò)增程序下的特點(diǎn)：
     

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