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產(chǎn)品信息
 

產(chǎn)品描述
 

Hieff NGS^® Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Module是針對(duì)Illumina®高通量測(cè)序平臺(tái)文庫(kù)構(gòu)建而專業(yè)設(shè)計(jì)的DNA末端修復(fù)/A尾添加模塊，具有高效、快速、易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化的優(yōu)勢(shì)。本產(chǎn)品兼容1 ng-1 μg片段化Input DNA，可在單管內(nèi)實(shí)現(xiàn)片段化DNA的末端補(bǔ)平、5'端磷酸化和3'端加A尾反應(yīng)，得到5'末端含磷酸基團(tuán)且3'末端帶有dA突出的DNA產(chǎn)物。該產(chǎn)物無(wú)需純化，即可使用Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module（Cat#12607）進(jìn)行文庫(kù)構(gòu)建接頭連接反應(yīng)。

本產(chǎn)品已與Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module（Cat#12607），2×Hieff Canace®Ⅱ High-Fidelity Mix for Library Amplification（Cat#12620）共同用于DNA文庫(kù)構(gòu)建，通過(guò)Illumina®高通量平臺(tái)測(cè)序驗(yàn)證其有效性。本產(chǎn)品中提供的所有試劑組分均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格質(zhì)檢，最高程度保障產(chǎn)品優(yōu)異性能與批間穩(wěn)定性。

產(chǎn)品組分
 

質(zhì)量控制
 

Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Enzyme 

1. SDS-PAGE純度：>95%。

2. 核酸內(nèi)切酶活性：50 μL反應(yīng)體系中加入10 μL本酶和1 μg φX174 RF I DNA，37°C孵育4小時(shí)。經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),RF II轉(zhuǎn)化比率<10%。

3. 磷酸酶活性：在磷酸酶活性檢測(cè)緩沖液中加入10 μL本酶和2.5 mM對(duì)硝基苯磷酸，37°C孵育4小時(shí)。經(jīng)光譜測(cè)定法檢測(cè)，405 nm處無(wú)對(duì)硝基苯陰離子特征吸收峰。

4. 功能活性：在1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Enzyme中加入1 μL本酶和0.5 μg包含5'和3'突出末端的片段化DNA，25°C孵育20分鐘。經(jīng)毛細(xì)管電泳檢測(cè)，末端修復(fù)、加dA尾并磷酸化的DNA比率>95%。

Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer

1. 16小時(shí)孵育檢測(cè)：50 μL反應(yīng)體系中包含1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer和1 μg HindIII-λDNA，37°C孵育16小時(shí)。經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，條帶無(wú)降解；50 μL反應(yīng)體系中包含1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer和1 μg T3 DNA，37°C孵育16小時(shí)。經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，條帶無(wú)降解。

2. 核酸內(nèi)切酶活性：50 μL反應(yīng)體系中包含1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer和1 μg φX174 RF I DNA，37°C孵育4小時(shí)。經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，RF II轉(zhuǎn)化比<10%。

3. RNase活性：在1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer中加入40 ng FAM-RNA，37°C孵育16小時(shí)。經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)，條帶無(wú)降解。

4. 磷酸酶活性：在磷酸酶活性檢測(cè)緩沖液中加入1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer和2.5 mM對(duì)硝基苯磷酸，37°C下孵育4小時(shí)。經(jīng)光譜測(cè)定法檢測(cè)，405 nm處無(wú)對(duì)硝基苯陰離子特征吸收峰。

測(cè)序驗(yàn)證
 

本品與Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module（Cat#12607），2×Hieff Canace® High-Fidelity Mix for Library Amplification（Cat#12620）共同用于DNA文庫(kù)構(gòu)建，已通過(guò)Illumina®高通量平臺(tái)測(cè)序驗(yàn)證其有效性。

運(yùn)輸與保存方法
 

冰袋運(yùn)輸。

-20℃保存，有效期1年。

注意事項(xiàng)
 

為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用方法
 

1. 將表1中各試劑解凍后，顛倒混勻，置于冰上備用。

2. 于無(wú)菌PCR管中配制表1所示反應(yīng)體系。

表1 末端修復(fù)/dA尾添加PCR反應(yīng)體系

3. 使用移液器輕輕吹打或振蕩混勻，并短暫離心將反應(yīng)液離心至管底。

4. 將上述PCR管置于PCR儀，設(shè)置表2所示反應(yīng)程序，進(jìn)行末端修復(fù)/dA尾添加反應(yīng)。

表2 末端修復(fù)/dA尾添加PCR反應(yīng)程序

5. 產(chǎn)物如需純化，可使用Hieff NGS® DNA Selection Beads（Cat#12601）或AMPure XP Beads（Cat#A63880）或其他等效產(chǎn)品。

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