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        1. 翌圣生物科技(上海)股份有限公司

          初級(jí)會(huì)員·12年

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          400-6111-883

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          40306ES20TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑(tunel試劑盒)
          參考價(jià): 面議
          具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
          • 40306ES20 產(chǎn)品型號(hào)
          • Yeasen/翌圣生物 品牌
          • 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
          • 上海市 所在地

          訪問(wèn)次數(shù):6623更新時(shí)間:2022-11-07 15:23:21

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          初級(jí)會(huì)員·12年
          聯(lián)人:
          曹女士
          話:
          400-6111-883
          機(jī):
          后:
          4006-111-883
          真:
          86-21-34615995
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          上海市浦東新區(qū)天雄路166弄1號(hào)3樓
          網(wǎng)址:
          www.yeasen.com

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          產(chǎn)品簡(jiǎn)介
          供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 20T
          貨號(hào) 40306ES20 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)
          主要用途 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒
          TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑(tunel試劑盒)對(duì)標(biāo)記反應(yīng)進(jìn)行了優(yōu)化,采用Z佳比例的FITC-12-dUTP和未標(biāo)記dNTP進(jìn)行3’-OH末端的核苷酸摻入,使得同一個(gè)斷裂的DNA片段末端可以形成更長(zhǎng)的“標(biāo)記尾巴"。該“標(biāo)記尾巴"減少了相鄰摻入dNTP上標(biāo)記基團(tuán)的空間位阻,增加每個(gè)斷裂片段上的熒光基團(tuán)數(shù)目,降低熒光基團(tuán)相鄰后可能造成的聚集和淬滅,從而提高檢測(cè)靈敏度,減少非特異性反應(yīng)。
          產(chǎn)品介紹

          TUNEL Apoptosis Detection Kit (FITC)

          TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(FITC)

          產(chǎn)品信息

          產(chǎn)品名稱(chēng)

          產(chǎn)品編號(hào)

          規(guī)格

          儲(chǔ)存

          價(jià)格元

          TUNEL Apoptosis Detection Kit (FITC) TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(FITC)

          40306ES20

          20T

          -20oC

          988.00

          TUNEL Apoptosis Detection Kit (FITC) TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(FITC)

          40306ES50

          50T

          -20oC

          1988.00

          TUNEL Apoptosis Detection Kit (FITC) TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(FITC)

          40306ES60

          100T

          -20oC

          3198.00

          產(chǎn)品描述

          細(xì)胞在發(fā)生凋亡時(shí),會(huì)激活一些DNA內(nèi)切酶,這些內(nèi)切酶會(huì)切斷核小體間的基因組DNA。細(xì)胞凋亡時(shí)抽提DNA進(jìn)行電泳檢測(cè),可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNA ladder。

          TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling)細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒FITC可以用來(lái)檢測(cè)組織細(xì)胞在凋亡期過(guò)程中細(xì)胞核DNA的斷裂情況。其原理是在末端脫氧核糖核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的作用下,在基因組DNA斷裂時(shí)暴露出的3′-羥基(3′-OH)末端摻入FITC-12-dUTP,從而可以用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

          本試劑盒對(duì)標(biāo)記反應(yīng)進(jìn)行了優(yōu)化,采用*比例的FITC-12-dUTP和未標(biāo)記dNTP進(jìn)行3’-OH末端的核苷酸摻入,使得同一個(gè)斷裂的DNA片段末端可以形成更長(zhǎng)的“標(biāo)記尾巴"。該“標(biāo)記尾巴"減少了相鄰摻入dNTP上標(biāo)記基團(tuán)的空間位阻,增加每個(gè)斷裂片段上的熒光基團(tuán)數(shù)目,降低熒光基團(tuán)相鄰后可能造成的聚集和淬滅,從而提高檢測(cè)靈敏度,減少非特異性反應(yīng)。

          本試劑盒應(yīng)用范圍廣,可以用于檢測(cè)冷凍或石蠟切片中的細(xì)胞凋亡情況,也可以檢測(cè)培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞的凋亡情況。

          產(chǎn)品組分

          編號(hào)

          組分

          產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格


          40306ES20(20T)

          40306ES50(50T)

          40306ES60100T)

          40306-A

          5×Equilibration Buffer

          750μl

          1.25 ml×2

          1.25 ml×3

          40306-B

          FITC-12-dUTP Labeling Mix

          100 μl

          250 μl

          250 μl×2

          40306-C

          Recombinant TdT Enzyme

          20 μl

          50 μl

          50 μl×2

          40306-D

          Proteinase K (2 mg/ml)

          40 μl

          100 μl

          100 μl×2

          40306-E

          DNase I (1 U/μl)

          5μl

          12.5μl

          25μl

          40306-F

          10 × DNase I Buffer

          100 μl

          250μl

          500μl

          運(yùn)輸與保存方法

          冰袋(wet ice)運(yùn)輸。

          本試劑盒儲(chǔ)存在-20,F(xiàn)ITC-12-dUTP Labling Mix避光儲(chǔ)存于-20,保質(zhì)期為一年。

          注意事項(xiàng)

          1)需自備用于洗滌細(xì)胞的PBS,用于封片的抗熒光淬滅封片液,用于固定的4%多聚甲醛。

          2)為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

          操作步驟

          一、樣品準(zhǔn)備

          A. 石蠟包埋組織切片

          1)室溫下將石蠟組織切片放入二甲苯中浸泡5min,重復(fù)一次,以*脫掉石蠟。

          2)室溫下用100%乙醇浸泡切片5min,重復(fù)一次。

          3)室溫下用梯度乙醇(90、80、70%)各浸洗1次,每次3min。

          4)用PBS輕輕潤(rùn)洗切片,并用濾紙小心吸干玻片上樣本周?chē)嘤嗟囊后w。這時(shí),可用石蠟筆或疏水筆在樣品周?chē)枥L樣品分布的輪廓,便于下游透性處理和平衡標(biāo)記操作。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,切勿讓樣品干燥,處理好的樣本放在濕盒中保持樣本的濕潤(rùn)。

          5) 配制Proteinase K工作液:按1:100的比例,用PBS作為稀釋液來(lái)稀釋2mg/ml的Proteinase K溶液,使其終濃度為20μg/ml。

          6)每個(gè)樣本上滴加100μl上述Proteinase K工作液,使其被全部覆蓋,室溫孵育20min。

          Proteinase K幫助組織和細(xì)胞對(duì)后續(xù)步驟的染色試劑通透。孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)增加組織切片在后續(xù)洗滌步驟中從載波片上脫落的風(fēng)險(xiǎn),過(guò)短則可能造成透性處理不充分,影響標(biāo)記效率。未得到更好的結(jié)果,可能需要優(yōu)化Proteinase K孵育的時(shí)間。

          7)用PBS溶液潤(rùn)洗樣本,輕輕去掉多余液體,并用濾紙小心吸干載玻片上樣本周?chē)囊后w。處理后的樣本放在濕盒中保存樣本的濕潤(rùn)。

          B. 組織冰凍切片

          1)將玻片浸沒(méi)在4%多聚甲\醛溶液(溶于PBS)中固定,室溫下孵育15min。

          2)輕輕去掉多余液體,并用濾紙小心吸干玻片上樣本周?chē)嘤嗟囊后w。

          3)將玻片浸沒(méi)在PBS溶液中,室溫孵育15min。

          4)輕輕去掉多余液體,并用濾紙小心吸干玻片上樣本周?chē)嘤嗟囊后w。這時(shí),可用石蠟筆或疏水筆在樣品周?chē)枥L樣品分布的輪廓,便于下游透性處理和平衡標(biāo)記操作。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,切勿讓樣品干燥,處理好的樣本放在濕盒中保持樣本的濕潤(rùn)。

          5) 配制Proteinase K工作液:按1:100的比例,用PBS作為稀釋液來(lái)稀釋2mg/ml的Proteinase K溶液,使其終濃度為20μg/ml。

          6)每個(gè)樣本上滴加100μl上述Proteinase K工作液,使其被全部覆蓋,室溫孵育10min。

          Proteinase K幫助組織和細(xì)胞對(duì)后續(xù)步驟的染色試劑通透。孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)增加組織切片在后續(xù)洗滌步驟中從載波片上脫落的風(fēng)險(xiǎn),過(guò)短則可能造成透性處理不充分,影響標(biāo)記效率。未得到更好的結(jié)果,可能需要優(yōu)化Proteinase K孵育的時(shí)間。

          7)用PBS溶液潤(rùn)洗樣本2-3次。

          8)輕輕去掉多余液體,并用濾紙小心吸干載玻片上樣本周?chē)囊后w。處理后的樣本放在濕盒中保存樣本的濕潤(rùn)。

          C. 細(xì)胞爬片的準(zhǔn)備

          在Lab-Tek載片小室(Chamber Slides)上培養(yǎng)貼壁細(xì)胞。在凋亡誘導(dǎo)處理之后,用PBS洗2遍載玻片。

          D. 細(xì)胞涂片的制備

          1)準(zhǔn)備多聚賴(lài)氨酸包被的載玻片吸取50–100 μl 0.01% (w/v)多聚賴(lài)氨酸水溶液,滴至每一片預(yù)清洗過(guò)的玻璃載玻片的表面。在將要用于固定細(xì)胞的區(qū)域?qū)⒍嗑圪?lài)氨酸溶液涂散為一薄層。待載玻片晾干之后,迅速用去離子水漂洗,然后讓包被后的載玻片在空氣中晾干30-60 min。包被后的載玻片能在室溫儲(chǔ)存數(shù)月。

          2)以約2×107個(gè)細(xì)胞/ml的濃度將細(xì)胞重懸于PBS中,吸取50-100μl細(xì)胞懸液滴于多聚賴(lài)氨酸包被的載玻片上,用一片干凈的載玻片輕柔的涂開(kāi)細(xì)胞懸液。

          3)固定細(xì)胞,將載玻片浸入裝有4%新鮮配制于PBS中的多聚甲醛的染色缸中,在4放置25min。

          4)洗滌載玻片,將其浸入PBS中,室溫放置5min。重復(fù)用PBS洗一次。

          5)輕輕去掉多余液體,并用濾紙小心吸干玻片上樣本周?chē)嘤嗟囊后w。這時(shí),可用石蠟筆或指甲油在樣品周?chē)枥L樣品分布的輪廓,便于下游透性處理和平衡標(biāo)記操作。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,切勿讓樣品干燥,處理好的樣本放在濕盒中保持樣本的濕潤(rùn)。

          6) 配制Proteinase K工作液:按1:100的比例,用PBS作為稀釋液來(lái)稀釋2mg/ml的Proteinase K溶液,使其終濃度為20μg/ml。

          7)每個(gè)樣本上滴加100μl上述Proteinase K溶液,使其被全部覆蓋,室溫孵育5min(也可浸于0.2%配制于PBS中的Triton X-100溶液中,室溫孵育5min進(jìn)行通透處理)。

          】:Proteinase K幫助組織和細(xì)胞對(duì)后續(xù)步驟的染色試劑通透。孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)增加組織切片在后續(xù)洗滌步驟中從載波片上脫落的風(fēng)險(xiǎn),過(guò)短則可能造成透性處理不充分,影響標(biāo)記效率。未得到更好的結(jié)果,可能需要優(yōu)化Proteinase K孵育的時(shí)間。

          8)在盛有PBS溶液的敞口燒杯中浸沒(méi)清洗樣本2-3次。

          9)輕輕去掉多余液體,并用濾紙小心吸干載玻片上樣本周?chē)囊后w。處理后的樣本放在濕盒中保存樣本的濕潤(rùn)。

          二、DNA酶處理陽(yáng)性對(duì)照的步驟(可選)

          在樣本通透處理后,用DNA酶I處理細(xì)胞來(lái)準(zhǔn)備陽(yáng)性對(duì)照載玻片。該流程通常會(huì)引起被處理的大多數(shù)細(xì)胞顯現(xiàn)綠色熒光。

          【注】DNA酶I處理固定的細(xì)胞會(huì)引起染色體DNA的斷裂,產(chǎn)生許多可標(biāo)記的DNA 3’-末端。

          1) 按1:10的比例用去離子水稀釋10×DNase I Buffer(每個(gè)樣本需用200 µl 1×DNase I Buffer,即需要用20µl 10×DNase I Buffer和180 µl去離子水混合稀釋),取其中100 µl滴加到已通透的樣本上,室溫孵育5min。 向剩余100μl 1×DNase I Buffer中加1μl DNase I (1U/μl),使其終濃度為10 U/ml。輕叩掉液體,加入100μl含5.5-10 units/ml DNase I的緩沖液,室溫孵育10min。

          2)輕輕叩掉液體,加入100μl含10U/ml DNase I 的緩沖液,室溫孵育10min。

          3)輕叩載玻片,去掉多余的液體,并將載玻片在裝有去離子水的染色缸中*洗3-4次。

          【注】:陽(yáng)性對(duì)照載玻片必須使用單獨(dú)的染色缸,否則陽(yáng)性對(duì)照載玻片上殘余的DNase I 可能會(huì)在實(shí)驗(yàn)載玻片上引入高背景。

          三、標(biāo)記與檢測(cè)

          1)按1:5的比例用去離子水稀釋5×Equilibration Buffer。

          2)每個(gè)樣本滴加100μl 1×Equilibration Buffer使其全部覆蓋待檢樣本區(qū)域,室溫孵育10-30分鐘。或者將載玻片放入一個(gè)含有 1×Equilibration Buffer的缸中,保證緩沖液沒(méi)過(guò)樣本。在平衡細(xì)胞的同時(shí)在冰上解凍FITC-12-dUTP Labling Mix,并且依照表1,準(zhǔn)備足夠量的用于所有實(shí)驗(yàn)的和可選陽(yáng)性對(duì)照反應(yīng)的TdT孵育緩沖液。對(duì)于面積小于5cm2的一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng),其體積是50μl,用50μl乘以實(shí)驗(yàn)和陽(yáng)性對(duì)照反應(yīng)的數(shù)目來(lái)確定所需TdT孵育緩沖液的總體積。對(duì)于表面積更大的樣本,可成比例的增大試劑體積。

          表1. 準(zhǔn)備用于實(shí)驗(yàn)的和可選陽(yáng)性對(duì)照反應(yīng)的TdT孵育緩沖液

          組分

          體積(μl/50μl體系)

          ddH2O

          34

          5×Equilibration Buffer

          10

          FITC-12-dUTP Labling Mix

          5

          Recombinant TdT Enzyme

          1

          陰性對(duì)照體系:準(zhǔn)備一份不含TdT酶的對(duì)照孵育緩沖液,用ddH2O替代TdT酶。

          3)在平衡后的區(qū)域周?chē)梦埾吹?00μl 1×Equilibration Buffer中的大部分,然后在5cm2面積的細(xì)胞上加入50μl TdT孵育緩沖液。不要讓細(xì)胞干掉。這之后的操作,載玻片要避光。

          4)把塑料蓋玻片蓋在細(xì)胞上以保證試劑的平均分布,在濕盒的底部放上用水浸濕的紙巾。將載玻片置于濕盒內(nèi),在37孵育60min。將濕盒用鋁箔紙包裹以避光。

          塑料蓋玻片在使用前可以切成兩半。折起蓋玻片的邊緣以便于移除和操作。

          5)移除塑料蓋玻片,并將切片置于PBS溶液中室溫孵育5min。

          6)輕輕去掉多余液體,換用新鮮的PBS溶液室溫孵育5 min,重復(fù)一次。

          7) 用濾紙輕輕擦掉樣本周?chē)氨趁娴腜BS溶液。注意:為了降低背景,載玻片在用PBS洗一遍后,可再用含0.1% Triton X-100和5mg/ml BSA的PBS洗3次,每次5min,這樣可將游離的未反應(yīng)標(biāo)記物清干凈。

          8) 樣本在染色缸中染色,在黑暗中將載玻片浸入裝有PI溶液1μg/ml,用PBS新鮮配制并稀釋?zhuān)?/span>的染色缸,室溫放置5min。可選操作:樣本在染色缸中染色,在黑暗中將載玻片浸入裝有DAPI溶液2μg/ml,用PBS新鮮配制并稀釋?zhuān)┑娜旧祝覝胤胖?min。

          9)洗滌樣本,將載玻片浸入去離子水中,室溫放置5min,重復(fù)2次,總共洗3次。

          10)叩干載玻片上多余的水并且用吸水紙擦拭細(xì)胞周邊的區(qū)域。

          11)立即在熒光顯微鏡下分析樣本,用標(biāo)準(zhǔn)的熒光過(guò)濾裝置在520±20nm的熒光下觀察綠色熒光;在>620nm下觀察PI的紅色熒光,或在460nm觀察藍(lán)色的DAPI。如有必要,載玻片能在4黑暗條件下存放一個(gè)晚上。PI/DAPI能將凋亡和未凋亡的細(xì)胞都染成紅色/藍(lán)色,只在凋亡的細(xì)胞核中才有FITC-12-dUTP摻入而定位的綠色熒光。

          四、利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)懸浮細(xì)胞

          1)將3-5×106個(gè)細(xì)胞用PBS在4離心(300×g)洗兩次,然后重懸在0.5ml PBS中。

          2)固定細(xì)胞,加入5ml 1%配制于PBS中的多聚甲\醛溶液,冰上放置20min。

          3)細(xì)胞在4300×g離心10min,去上清并且重懸于5ml PBS。重復(fù)洗一次,并用0.5 ml PBS重懸細(xì)胞。

          4)通透細(xì)胞,加入5ml冰上預(yù)冷的70%乙醇,在-20孵育4小時(shí)。細(xì)胞能在70%乙醇中-20條件下保存一周,或者,細(xì)胞可用配制于PBS中的0.2% Triton X-100溶液通透,室溫放置5min。

          5)細(xì)胞在300×g離心10min,并用5 ml PBS重懸。重復(fù)離心,并1ml PBS重懸。

          6)轉(zhuǎn)移2×106個(gè)細(xì)胞至一個(gè)1.5ml的微量離心管。

          7)300×g離心10min,去上清,并用80μl 1×Equilibration Buffer重懸。室溫孵育5min。

          8)在平衡細(xì)胞的同時(shí),在冰上融解FITC-12-dUTP標(biāo)記混合物,并且依照表1,準(zhǔn)備足夠量的用于所有反應(yīng)的TdT孵育緩沖液。對(duì)于2×106個(gè)細(xì)胞的一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng),其體積是50μl,用50μl乘上反應(yīng)數(shù)目來(lái)確定所需TdT孵育緩沖液的總體積。

          9)細(xì)胞在300×g離心10min,去上清并把沉淀重懸在50μl TdT孵育緩沖液中,37孵育60min,避光。每隔15min用微量移液器輕輕重懸細(xì)胞。

          10)加入1ml 20mM EDTA終止反應(yīng),用微量移液器輕柔混勻。

          11)300×g離心10min,去上清并把沉淀重懸在1ml配制于PBS中的0.1% Triton X-100溶液,其中含5mg/ml BSA,重復(fù)一次,總共洗2次。

          12)300×g離心10min,去上清并把細(xì)胞沉淀重懸在0.5ml PI溶液(5μg/ml)中,其中包含250μg 無(wú)DNA酶的Rnase A。

          13)在黑暗中室溫孵育細(xì)胞30min。

          14)用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞,測(cè)量520±20nm的FITC-12-dUTP的綠色熒光和>620nm的PI紅色熒光。PI將凋亡和未凋亡的細(xì)胞都染成紅色,只在凋亡細(xì)胞核中才有FITC-12-dUTP摻入而定位的綠色熒光。


          實(shí)驗(yàn)舉例3T3-L cell)

          陰性對(duì)照


          相關(guān)產(chǎn)品

          產(chǎn)品編號(hào)

          產(chǎn)品名稱(chēng)

          規(guī)格

          價(jià)格(元)

          40306ES20

          TUNEL Apoptosis Detection Kit (FITC) TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(FITC

          20T

          1178.00

          40306ES50

          TUNEL Apoptosis Detection Kit (FITC) TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(FITC

          50T

          2680.00

          40306ES60

          TUNEL Apoptosis Detection Kit (FITC) TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(FITC

          100T

          4080.00

          40307ES20

          TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(Alexa Fluor 488

          20T

          1250.00

          40307ES50

          TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(Alexa Fluor 488

          50T

          3080.00

          40307ES60

          TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(Alexa Fluor 488

          100T

          4800.00

          40308ES20

          TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(Alexa Fluor 647

          20T

          1250.00

          40308ES50

          TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(Alexa Fluor 647

          50T

          3080.00

          40308ES60

          TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(Alexa Fluor 647

          100T

          4800.00







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