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10180ES50動(dòng)物組織直接PCR試劑盒 Animal Tissue Direct PCR Kit
| 參考價(jià): | 面議 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 10180ES50 產(chǎn)品型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：1221更新時(shí)間：2019-05-22 10:06:17
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
|---|
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
Animal Tissue Direct PCR Kit | 10180ES50 | 50T | 326.00 |
Animal Tissue Direct PCR Kit | 10180ES70 | 200T | 1236.00 |
產(chǎn)品描述
動(dòng)物組織直接PCR試劑盒是一款可直接對(duì)不同動(dòng)物組織進(jìn)行PCR擴(kuò)增的試劑盒，適應(yīng)性廣、穩(wěn)定性強(qiáng)。試劑盒采用*的裂解緩沖液體系，可以快速的裂解多種動(dòng)物組織樣品并釋放出基因組DNA，不需要除去蛋白、RNA等，即可將釋放出的基因組DNA作為模板直接用于PCR反應(yīng)。此外，樣品使用量少，低至5 mg動(dòng)物組織即可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
本試劑盒中提供的2× Tissue Master Mix具有很強(qiáng)的擴(kuò)增兼容性，能直接以待測(cè)樣品裂解液為模板，進(jìn)行高效特異性擴(kuò)增。該試劑為2倍濃縮PCR反應(yīng)混合液，包含了用于PCR擴(kuò)增除模板和引物外的所有組分，大大簡(jiǎn)化操作過程，降低污染幾率。
該試劑盒可用于轉(zhuǎn)基因型鑒定、動(dòng)物基因分型等。
產(chǎn)品組分
類別 | 編號(hào) | 組分 | 產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格 | 儲(chǔ)存 | |
10180ES50（50 T） | 10180ES70（200 T） | ||||
Part I | 10180-A | Buffer AL | 5 mL | 20 mL | 室溫或4℃ |
10180-B | Protease | 220 μL | 880 μL | 4℃ | |
10180-C | 6× DNA Loading Buffera | 1.5 mL | 1.5 mL | 4℃或-20℃ | |
Part II | 10180-D | 2× Tissue Master Mixb | 500 μL | 1 mL×2 | -20℃ |
a）6× DNA Loading buffer：不含SDS。
b）2× Tissue Master Mix：包含Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR反應(yīng)增強(qiáng)劑、優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑等。
運(yùn)輸方法
冰袋運(yùn)輸。
保存方法
1. 試劑10180-A【Buffer AL】，在常溫干燥條件下，可保存12個(gè)月，如需保存更長(zhǎng)時(shí)間可置于4℃。低溫保存，易出現(xiàn)沉淀，可平衡至室溫或37℃水浴10 min，待沉淀溶解后，混勻使用。
2. 試劑10180-B【Protease】，具有*配方，為保證其更好的活性和穩(wěn)定性，建議4℃保存，切勿置于-20℃。
3. 試劑10180-C【6× DNA Loading Buffer】，可置于4℃或-20℃長(zhǎng)期保存。
4. 試劑10180-D【2× Tissue Master Mix】，-20℃保存，避免反復(fù)凍融。
操作方法
樣品基因組DNA釋放
1. 在離心管中加入100 μL Buffer AL，4 μL Protease，輕輕渦旋混勻。
【注】：Buffer AL與Protease混合后盡快使用，不宜長(zhǎng)期保存。
2. 取5-10 mg動(dòng)物組織，置于上述離心管中，輕輕渦旋混勻。
【注】：組織應(yīng)盡量剪碎，以便酶解反應(yīng)更順利進(jìn)行。
3. 65℃孵育10-30 min，然后95℃處理5 min。
【注】：65℃孵育，一般10 min即可滿足多數(shù)PCR需求。若需要的DNA量較大或樣品較難酶解，可將時(shí)間延長(zhǎng)至30 min。組織塊不需*酶解，殘余的部分在后續(xù)離心步驟中可被除去。
4. 12000 rpm離心5 min。
5. 將上清轉(zhuǎn)移至新的離心管，4℃或-20℃保存或直接用于PCR擴(kuò)增。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)體系
組分 | 體積（μL） | 體積（μL） | 終濃度 |
2× Tissue Master Mix | 10 | 25 | 1× |
Forward Primer (10 μM) | 0.5 | 1 | 0.2-0.25 μM |
Reverse Primer (10 μM) | 0.5 | 1 | 0.2-0.25 μM |
裂解產(chǎn)物（DNA模板） | 2 | 5 | - |
ddH2O | To 20 | To 50 | - |
【注】：各組分使用前應(yīng)充分混勻。
a）模板使用量：建議1-10%總體系。避免超過總體系的20%。
b）引物終濃度：0.2-0.25 μM可以得到較好結(jié)果。反應(yīng)性能較差時(shí)，可在0.1-0.5 μM范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度。
c）反應(yīng)體系：推薦使用20 μL或50 μL，以保證目的基因擴(kuò)增的有效性和重復(fù)性。
d）體系配制：配制好PCR反應(yīng)體系，置于渦旋儀上渦旋混勻，瞬時(shí)離心將反應(yīng)液集于管底。
e）對(duì)照反應(yīng)：建議進(jìn)行PCR時(shí)，設(shè)置陽性和陰性PCR對(duì)照反應(yīng)以便于排除假陽性或假陰性的干擾。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
【注】：a）退火溫度：請(qǐng)參考引物的理論 Tm 值，退火溫度可設(shè)置低于引物理論值 2-5℃。
b）延伸時(shí)間：需要根據(jù)片段的長(zhǎng)度來確定，對(duì)于1 kb以內(nèi)的DNA片段，建議延長(zhǎng)時(shí)間為30 sec。
注意事項(xiàng)
1. 建議使用新鮮采取的動(dòng)物組織，若為長(zhǎng)期冷凍組織，應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致模板的降解，影響PCR效率。
2. 試劑Buffer AL若低溫保存，易產(chǎn)生沉淀。在使用前務(wù)必將其在室溫中放置一段時(shí)間，也可在37℃水浴中預(yù)熱10 min，以溶解沉淀，混勻后再使用。
3. 電泳檢測(cè)時(shí)，切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則，電泳時(shí)會(huì)在泳道中出現(xiàn)一大團(tuán)拖尾亮帶，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
4. 建議擴(kuò)增片段長(zhǎng)度1 kb以內(nèi)，以便擴(kuò)增效率*。
5. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
常見問題與解決方法
常見問題 | 可能原因 | 解決方法 |
陽性對(duì)照、待測(cè)樣本均無條帶。 | PCR反應(yīng)體系或反應(yīng)條件不合適。 | 使用梯度PCR摸索PCR*反應(yīng)條件。 |
PCR試劑保存不當(dāng)失去活性。 | 2× PCR Mix應(yīng)保存于-20℃，使用時(shí)避免反復(fù)凍融。若使用頻繁，可在4℃短時(shí)間存放。 | |
引物設(shè)計(jì)問題。 | 嘗試重新設(shè)計(jì)引物進(jìn)行檢查。 | |
陽性對(duì)照有目的條帶，待測(cè)樣本無條帶或條帶弱。 | 不當(dāng)儲(chǔ)存或長(zhǎng)期儲(chǔ)存引起試劑活性喪失。 | 使用新鮮的試劑。 |
加入組織裂解液過量。 | 增大反應(yīng)體系，或減少裂解液的用量。 | |
樣本裂解混合液保存不當(dāng)或保存時(shí)間過久，DNA基因組已經(jīng)降解。 | 裂解混合液液可在4℃保存2-3天，盡量使用新制備的裂解液混合液進(jìn)行PCR。 | |
模板加入量不適合。 | 在反應(yīng)體系10-20%范圍內(nèi)優(yōu)化模板加入量。反應(yīng)效性能較差時(shí)，可以降模板濃度調(diào)節(jié)到低于10%的范圍。 | |
PCR循環(huán)數(shù)不足。 | 適當(dāng)增加PCR的循環(huán)數(shù)，推薦在35-40循環(huán)為佳。因?yàn)槟０鍙?fù)雜，一般PCR反應(yīng)要比用純化的 DNA模板多5-10個(gè)循環(huán)為佳。 | |
非特異性擴(kuò)增 | PCR退火溫度太低，循環(huán)數(shù)、引物濃度或模板濃度太高。 | 增加PCR退火溫度，降低PCR循環(huán)數(shù)、引物濃度或模板濃度。 |
PCR引物錯(cuò)配。 | 重新設(shè)計(jì)PCR引物。 | |
配制PCR反應(yīng)體系時(shí)溫度太高或配制完成后放置時(shí)間太久。 | PCR反應(yīng)體系的配制在低溫下進(jìn)行，配制完成后盡快進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。 | |
陰性對(duì)照出現(xiàn)目的條帶 | 操作工具或試劑污染。 | 實(shí)驗(yàn)所有試劑或器材均應(yīng)高壓滅菌。操作時(shí)應(yīng)小心輕柔，防止將靶序列吸入加樣槍內(nèi)或?yàn)R出離心管外。 |
樣本間交叉污染。 | 每個(gè)取樣器只對(duì)一個(gè)樣本使用；或取完一個(gè)樣本后，將取樣器刃口浸入2%的次氯酸鈉溶液中，反復(fù)涮洗，然后用干凈的紙巾擦干殘液。 |
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
10181ES50 | Mouse Tissue Direct PCR Kit 小鼠組織直接PCR試劑盒 | 50T | 326.00 |
10181ES70 | 200T | 1236.00 | |
10182ES50 | Animal Blood Direct PCR Kit 全血直接PCR試劑盒 | 50T | 326.00 |
10182ES70 | 200T | 1236.00 | |
10183ES50 | Plant Tissue PCR Kit 植物組織直接PCR試劑盒 | 50T | 326.00 |
10183ES70 | 200T | 1236.00 |
HB170907
