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參考價: | 面議 |
- 10301ES40 產(chǎn)品型號
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù):660更新時間:2022-02-09 15:29:22
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- www.yeasen.com
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 40000 U(40 KU) |
---|---|---|---|
貨號 | 10301ES40 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
本品主要適用于標(biāo)記RNA 3’-末端,環(huán)化RNA和DNA寡聚核苷酸以及克隆cDNA等核酸操作。
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱
產(chǎn)品編號
規(guī)格
價格(元)
Hieff® Quick T4 DNA Ligase (400 U/µL)
10301ES40
40000 U (40 KU)
446.00
產(chǎn)品描述Hieff® Quick T4 DNA Ligase是一款可用于NGS建庫過程中DNA片段和接頭連接的單酶產(chǎn)品,該產(chǎn)品已經(jīng)過高通量測序驗(yàn)證,質(zhì)量優(yōu)異。對于無需進(jìn)行體系調(diào)整的客戶,推薦選購Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module(Cat#12607)。
產(chǎn)品組分組分編號
組分名稱
規(guī)格
10301-A
Hieff® Quick T4 DNA Ligase (400 U/µL)
100 µL
10301-B
10 × T4 DNA Ligase Buffer
250 µL
運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸,-20℃保存,有效期2年。
單位定義
在20 μL的連接反應(yīng)體系中,6 μg的λDNA-Hind Ⅲ分解物在16℃下反應(yīng)30 min時,催化50%以上的DNA片段發(fā)生連接所需要的酶量定義為1個活性單位(U)。
注意事項(xiàng)
1)Buffer在融解時,如果出現(xiàn)少量沉淀屬正?,F(xiàn)象,請顛倒混勻后使用。2)為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
3)本產(chǎn)品僅作科研用途!使用方法
1.目前主流的合并法DNA建庫試劑盒,其末端修復(fù)和加A處理后一般不純化,直接進(jìn)行接頭連接。本試劑盒可與主流的商業(yè)化末端修復(fù)加A體系兼容,進(jìn)行接頭連接。反應(yīng)體系請參考如下配制,渦旋瞬離后置于20℃,反應(yīng)15 min即可。
表1. Adapter Ligation體系
名稱
體積(μL)
dA-tailed DNA
60
10 × T4 DNA Ligase Buffer
10
50% PEG6000
10*
DNA Adapter
X**
Hieff® Quick T4 DNA Ligase
1-5***
ddH2O
To 100
【注】:*試劑盒內(nèi)未提供50% PEG6000,需自行準(zhǔn)備。
**接頭用量參考表2。
***Hieff® Quick T4 DNA Ligase用量可根據(jù)需要添加1-5 μL。
2. Adapter的質(zhì)量和使用濃度直接影響連接效率及文庫產(chǎn)量。Adapter用量過高可能會產(chǎn)生較多Adapter Dimer,用量較低可能會影響連接效率及文庫產(chǎn)量。表2列舉了使用本試劑盒,不同Input DNA量推薦的Adapter使用量。
表2. 500 pg-1 μg Input DNA推薦的Adapter使用濃度
Input DNA
Adapter : Input DNA摩爾比
Input DNA
Adapter : Input DNA摩爾比
1 μg
10:1
50 ng
100:1
500 ng
20:1
25 ng
200:1
250 ng
40:1
1 ng
200:1
100 ng
100:1
500 pg
400:1
【注】:Input DNA摩爾數(shù)(pmol)≈ Input DNA質(zhì)量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均長度(bp)]。
【接頭添加計(jì)算舉例】:當(dāng)Input DNA為100 ng,Input DNA長度為300 bp時,接頭應(yīng)該添加多少?
第一步,計(jì)算Input DNA摩爾數(shù)。公式:Input DNA摩爾數(shù)(pmol)≈ Input DNA質(zhì)量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均長度(bp)];
Input DNA摩爾數(shù)(pmol)=100 ÷(0.66×300)=0.5 pmol;
第二步,計(jì)算接頭添加摩爾數(shù)。根據(jù)表2查詢接頭添加比例;
根據(jù)表2,查得Input DNA 100ng時接頭添加比例100:1,則接頭添加摩爾數(shù)=100×0.5 pmol=50 pmol;
第三步,計(jì)算接頭添加體積。接頭濃度=15 μmol/L(如使用其他接頭,濃度需要依據(jù)其他接頭濃度參數(shù));
接頭添加體積=接頭添加摩爾數(shù)(50 pmol)÷接頭濃度(15 μmol/L)=3.34 μL(注:15 μmol/L=15 pmol/μL)
綜上,接頭可添加3.4 μL。(注:接頭最大加入體積不超過5 μL)
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貨號
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