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詳細介紹
GIBCO.雙抗100ml 15140-122抗體定義：
1：能與相應(yīng)抗原(表位)特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。
2：在人和動物體內(nèi)，由于抗原或半抗原入侵刺激機體而在細胞中產(chǎn)生的免疫球蛋白。能可逆、非共價、特異地與相應(yīng)抗原結(jié)合，形成抗原-抗體復(fù)合體。
3：機體內(nèi)B細胞在抗原刺激下所產(chǎn)生的具特異性免疫功能的球蛋白。
4：具有抗原結(jié)合部位，能與抗原分子上相應(yīng)表位發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。
抗體簡介：
抗體(antibody)指機體的免疫系統(tǒng)在抗原刺激下，由B淋巴細胞或記憶細胞增殖分化成的漿細胞所產(chǎn)生的、可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白。主要分布在血清中，也分布于組織液及外分泌液中。
抗體的概念：
初有人用電泳證明血清中抗體活性在γ球蛋白部分，故曾把抗體統(tǒng)稱為丙種(γ)球蛋白。后來發(fā)現(xiàn)，抗體并不都在γ區(qū)；并且位于γ區(qū)的球蛋白，也不一定都具有抗體活性。
1964年，世界衛(wèi)生組織舉行專門會議，將具有抗體活性以及與抗體相關(guān)的球蛋白統(tǒng)稱為免疫球蛋白(Ig)，如骨髓瘤蛋白，巨球蛋白血癥、冷球蛋白血癥等患者血清中存在的異常免疫球蛋白以及正常人天然存在的免疫球蛋白亞單位等。因而免疫球蛋白是結(jié)構(gòu)化學(xué)的概念，而抗體是生物學(xué)功能的概念。可以說，幾乎所有抗體都是免疫球蛋白（極少數(shù)抗體為RNA），但并非所有免疫球蛋白都是抗體。
抗體分類：
多克隆抗體
單克隆抗體
多克隆抗體的制備：
（1）抗原制備
（2）動物免疫
（3）血清采集與檢測
（4）多抗純化與保存
單克隆抗體的制備概述：
B淋巴細胞在抗原的刺激下，能夠分化、增殖形成具有針對這種抗原分泌特異性抗體的能力。B細胞的這種能力和量是有限的，不可能持續(xù)分化增殖下去，因此產(chǎn)生免疫球蛋白的能力也是極其微小的。將這種B細胞與非分泌型的骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞，再進一步克隆化，這種克隆化的雜交瘤細胞是既具有瘤的無限生長的能力，又具有產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細胞的能力，將這種克隆化的雜交瘤細胞進行培養(yǎng)或注入小鼠體內(nèi)即可獲得大量的高效價、單一的特異性抗體。這種技術(shù)即稱為單克隆抗體技術(shù)。
單克隆抗體的制備過程：
1）免疫脾細胞的制備 制備單克隆抗體的動物多采用純系 Balb/c小鼠。免疫的方法取決于所用抗原的性質(zhì)。免疫方法同一般血清的制備，也可采用脾內(nèi)直接免疫法。
2）骨髓瘤細胞的培養(yǎng)與篩選 在融合前，骨髓瘤細胞應(yīng)經(jīng)過含8-AG的培養(yǎng)基篩選，防止細胞發(fā)生突變恢復(fù)HGPRT的活性（恢復(fù)HGPRT的活性的細胞不能在含8-AG的培養(yǎng)基中存活）。骨髓瘤細胞用10%小牛血清的培養(yǎng)液在細胞培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，融合前24h換液一次，使骨髓瘤細胞處于對數(shù)生長期。
3）細胞融合的關(guān)鍵: 1技術(shù)上的誤差常常導(dǎo)致融合的失敗。例如，供者淋巴細胞沒有查到免疫應(yīng)答。這必然要失敗的。
2融合試驗大的失敗原因是污染，融合成功的關(guān)鍵是提供一個干凈的環(huán)境，以及適宜的無菌操作技術(shù)。
4）陽性克隆的篩選 應(yīng)盡早進行。通常在融合后10天作*次檢測，過早容易出現(xiàn)假陽性。檢測方法應(yīng)靈敏、準確、而且簡便快速。具體應(yīng)用的方法應(yīng)根據(jù)抗原的性質(zhì)，以及所需單克隆抗體的功能進行選擇。常用的方法有 RIA法、 ELISA法和免疫熒光法等。其中ELISA法較簡便，RIA法準確。陽性克隆的篩選應(yīng)進行多次，均陽性時才確定為陽性克隆進行擴增。
5）克隆化 克隆化的目的是為了獲得單一細胞系的群體?？寺』瘧?yīng)盡早進行并反復(fù)篩選。這是因為初期的雜交瘤細胞是不穩(wěn)定的，有丟失染色體的傾向。反復(fù)克隆化后可獲得穩(wěn)定的雜交瘤細胞株。
動物免疫
細胞融合
克隆篩選
交雜瘤細胞的克隆化
腹水制備與單抗純化
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