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          上海滬鼎生物科技有限公司>>ELISA試劑盒>>人ELISA試劑盒價(jià)格>>D-10738人瘦素(LEP)ELISA試劑盒免費(fèi)代測

          人瘦素(LEP)ELISA試劑盒免費(fèi)代測

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          • 人瘦素(LEP)ELISA試劑盒免費(fèi)代測

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          訂貨量 1
          具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
          • 型號 D-10738
          • 品牌 BIM
          • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
          • 所在地 上海市

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          更新時(shí)間:2019-07-15 15:20:48瀏覽次數(shù):1125

          聯(lián)系我們時(shí)請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,謝謝!

          產(chǎn)品簡介

          供貨周期 現(xiàn)貨 應(yīng)用領(lǐng)域 生物產(chǎn)業(yè)
          “人瘦素(LEP)ELISA試劑盒免費(fèi)代測"的使用目的:本試劑盒用于測定血清、血漿及相關(guān)液體樣本中產(chǎn)品含量。其它相關(guān)說明書請咨詢我司在線人員或業(yè)務(wù)人員!

          詳細(xì)介紹

          一.“人瘦素(LEP)ELISA試劑盒免費(fèi)代測”實(shí)驗(yàn)原理

          ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。在測定時(shí),受檢標(biāo)本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。

          二.實(shí)驗(yàn)材料與試劑配制

          1.儀器與材料:酶標(biāo)儀(使用前預(yù)熱30分鐘),微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水,濾紙。

          2. 洗液的配制:按1:30的比例配制洗液備用。

          三.樣品收集、處理及保存

          1).細(xì)胞培養(yǎng)上清液:

          適用于檢測體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份。用無菌管收集細(xì)胞上清液液,以1000×g離心15分鐘,收集上清液。

          2)細(xì)胞:

          用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次,調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104-106/ml 左右,通過反復(fù)凍融,使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,或者細(xì)胞超聲粉碎,離心取上清液液檢測。

          3)血清:

          在室溫下,血液自然凝固,以1000×g離心15分鐘,取上清液待測。

          4)血漿:

          應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合后靜置10-20 分鐘后,以1000×g離心15分鐘,收集上清液。

          5)體液:

          包括胸腹水、腦脊液,分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集,以1000×g離心15分鐘,收集上清液。

          6.)組織標(biāo)本:

          切取組織標(biāo)本,稱取重量0.5mg,加入500ul 的PBS,用手工或勻漿器,或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿,以2000-3000 rmp離心20 分鐘,收集上清液進(jìn)行檢測。

          樣品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

          7)保存:

          如果樣品不能立即檢測,應(yīng)將其分裝,-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

          四.“人瘦素(LEP)ELISA試劑盒免費(fèi)代測”操作步驟

          1)取出試劑盒,室溫(20-25℃)放置30分鐘。

          2)分組:取出96孔板,根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組(6個(gè)濃度)、空白孔、待測樣品組。

          3)標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:準(zhǔn)備小試管6 只,依次編好號碼,先在各小試管中加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ul,然后取原濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ul加入一只已編好號的試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul加入第三只試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第四只試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul加入第五只試管中,充分混勻;然后在該試管中取100ul,棄掉。第六只試管作為0 號標(biāo)準(zhǔn)品。

          注:為減少實(shí)驗(yàn)誤差,保證準(zhǔn)確性,建議設(shè)置復(fù)孔。

          4)加樣:依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中;空白對照孔加入50ul的蒸餾水;其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標(biāo)記的抗體10ul。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

          5)溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

          6)洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒棄去,如此重復(fù)5 次,拍干。

          7)加酶標(biāo)溶液:標(biāo)準(zhǔn)品組、待測樣本組各孔中加入50ul的酶標(biāo)溶液(空白對照孔除外)。

          8)溫育:酶標(biāo)板用封板紙密封后,放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時(shí)。

          9)洗板:用稀釋后的洗滌液注滿每孔,靜置15-30s,充分清洗酶標(biāo)板5次,用吸水紙*拍干。

          10)顯色:各孔加入顯色劑A液50ul后,再加入顯色劑B液50ul。

          11)終止:25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘,加入50ul終止液。

          12)讀板:在450nm波長讀取各孔的OD值。

          注:讀板時(shí)必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡,讀板時(shí)間控制在終止反應(yīng)后的30分鐘內(nèi),以免影響準(zhǔn)確性。

          五.?dāng)?shù)據(jù)計(jì)算

          以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,即為樣品的實(shí)際濃度。

          六.注意事項(xiàng)

          1)實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭,避免交叉污染。

          2)加樣:加樣時(shí),要控制加樣速度,避免*孔與zui后一孔間的時(shí)間間隔過大,否則將會導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間,從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性。

          3)孵育:嚴(yán)格按照說明書上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行。

          反應(yīng)時(shí)間的控制:加入底物后請定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化,如果顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。

          4)建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高,應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋,計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

          5)建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)(即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線,試用幾個(gè)標(biāo)本),如果對本試劑盒有任何疑問,可和所購經(jīng)銷商,如果因運(yùn)輸過程導(dǎo)致試劑盒失效,可要求調(diào)換,但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。

          七.保存條件及有效期

          1.試劑盒保存:2-8℃

          2.有效期:6個(gè)月

          八.訂貨說明

          1)賣方確保所訂產(chǎn)品與目錄技術(shù)指標(biāo)保持*;

          2)為了確保買方產(chǎn)品在運(yùn)輸中的質(zhì)量,對有特殊要求的低溫產(chǎn)品予以濕冰運(yùn)輸。

          3)收到貨物后如出現(xiàn)質(zhì)量問題,買方需在收到貨物一個(gè)月內(nèi)向賣方提出書面異議。買方逾期不提出異議,視為貨物符合其要求,賣方不付任何責(zé)任。

          4)出現(xiàn)質(zhì)量以外的問題,如破損等,買方應(yīng)在收貨后一個(gè)周內(nèi)提出。買方未按時(shí)提出異議,視為該產(chǎn)品合格。

          本公司對所有售出的產(chǎn)品保證質(zhì)量,并提供良好的售后服務(wù),有關(guān)產(chǎn)品質(zhì)量的投訴,請?jiān)谑盏截浳锏?2天內(nèi)以書面形式提出,并向我公司技術(shù)人員提供相應(yīng)的材料,我們會及時(shí)派人解決。所有形式的賠償或退換僅限于產(chǎn)品本身,不涉及其他間接內(nèi)容。凡購買本公司任意款elisa試劑盒,均可享受免費(fèi)代測服務(wù),并提供技術(shù)指導(dǎo)。

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