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試劑盒檢測(cè)方法內(nèi)容包括了哪些？
閱讀：1282 發(fā)布時(shí)間：2014-9-18 根據(jù)小鼠elisa試劑盒的檢測(cè)目的和操作方式的分析來(lái)看有三種基本方法，且在實(shí)驗(yàn)前要有相關(guān)的準(zhǔn)備與了解，那么試劑盒的檢測(cè)方法內(nèi)容包括了哪些呢？上海滬鼎說(shuō)給您聽：
1. 雙抗體(原)夾心法：
檢測(cè)抗原(體)的常見方法，應(yīng)用針對(duì)抗原兩個(gè)不同決定族的兩種單抗分別作為固相載體和酶標(biāo)抗體檢測(cè)溶液中的抗原(適用于二價(jià)以上抗原，不能測(cè) 小分子半抗原)。
2. ELISA試劑盒間接法：
檢測(cè)抗體的方法，利用酶標(biāo)記的抗抗體(第二抗體)檢測(cè)已與固相抗原結(jié)合的抗體。
3. 競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)：
抗原或小分子半抗原、抗體，以測(cè)抗原為例，使待測(cè)抗原和酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)與固相抗體結(jié)合，結(jié)果如待測(cè)抗原含量越多，與固相抗體結(jié)合的酶標(biāo)抗原就越少，顯色越淺，二者呈負(fù)相關(guān)。
·ELISA試劑盒分類有這兩種
1. 采用雙抗體二步夾心法測(cè)定標(biāo)本中各種動(dòng)物相關(guān)指標(biāo)的水平。
2. 采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。
ELISA試劑穩(wěn)定、易保存、操作簡(jiǎn)便，既可以做定性試驗(yàn)也可以做定量分析等優(yōu)點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于微生物學(xué)、寄生蟲學(xué)、腫瘤學(xué)和細(xì)胞因子等領(lǐng)域。影響因素較多，加強(qiáng)質(zhì)量管理才能充分發(fā)揮其方法學(xué)的優(yōu)點(diǎn)。
·在小鼠elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)開始之前，您需要準(zhǔn)備：
1. 應(yīng)將盒內(nèi)各試劑取出，室溫放置至少30分鐘。
2. 準(zhǔn)備各種實(shí)驗(yàn)儀器及材料，如微量移液器，吸頭，醫(yī)用蒸餾水等。
3. 濃縮洗液與醫(yī)用蒸餾水1：19倍稀釋后成為應(yīng)用洗滌液。
4. 濃縮樣品稀釋液與醫(yī)用蒸餾水1：4倍稀釋成應(yīng)用樣品稀釋液。
5. 用ELISA試劑盒應(yīng)用樣品稀釋液來(lái)稀釋樣品，按照1：100的體積比來(lái)稀釋樣品如10μl的樣品加入到1ml的應(yīng)用樣品稀釋液中，充分混勻待用。
·ELISA試劑盒洗滌次數(shù)的經(jīng)驗(yàn)法則
洗滌次數(shù)越多，背景越低。太多次的洗滌會(huì)降低信號(hào)強(qiáng)度，使其難以測(cè)定。通常的做法是在每次抗體或抗原孵育后重復(fù)洗滌三次。不過(guò)ELISA板的商會(huì)對(duì)洗滌次數(shù)提出建議。一般而言，商包被平板需要的洗滌次數(shù)比用戶包被的平板要少。對(duì)于用戶包被的ELISA板，必須優(yōu)化洗滌次數(shù)。
控制洗滌量和洗滌次數(shù)的另一種方法是加入過(guò)量的洗滌液。一般來(lái)說(shuō)，96孔板的每個(gè)孔能容納330至460μl。不過(guò)，有些自動(dòng)化洗板機(jī)可設(shè)置程序，分配遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出這個(gè)量的洗滌液，比如1ml。它是如何做到的呢？上海滬鼎生物技術(shù)表明：其實(shí)很簡(jiǎn)單，就是在分液的同時(shí)打開吸液功能。換句話說(shuō)，隨著分液器分配更多的液體，抽吸器也將液體吸出。這種技術(shù)能增加洗滌量，但不會(huì)溢出到其他孔中。
·ELISA試劑盒抽吸
還有一些參數(shù)會(huì)影響洗滌步驟的效果。這些參數(shù)包括吸液高度和吸入位置，這兩者都能調(diào)整，以降低背景和差異。殘留液體中包含未結(jié)合的抗原或抗體，它們會(huì)增加背景信號(hào)。殘留量越小，殘留液體越少，轉(zhuǎn)移到下一步的干擾液體也就越少。
吸液高度會(huì)明顯影響殘留量；如果洗滌吸頭與反應(yīng)孔底部的距離稍大，那就會(huì)讓殘留量急劇增加。反之，如果試劑盒洗滌吸頭壓著反應(yīng)孔底部，那么也會(huì)使吸液效率降低，殘留量增加。
