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新學(xué)期ELISA曲線問題解析
閱讀:1119 發(fā)布時間:2015-3-19日前,我公司錢在售后問題處理過程中,接到了遵義醫(yī)學(xué)院許老師的實驗,在問題描述中,許老師問道:“我做的ELISA沒有試劑盒,都是自己包板封閉孵育。做了很長時間,標準曲線的梯度都不好。剛加完顯色劑的時候梯度還算明顯,但是顯色比較淺,隨著時間延長(大概6、7分鐘)以后梯度就不明顯了。終止反應(yīng)后測得的值梯度就沒有了。"請問這是怎么回事?
關(guān)于許老師的疑問,錢為之安排的技術(shù)員解析道:
①樣本中有能夠催化底物的物質(zhì),沒洗下來。
②包被、酶標重新做梯度,先用較低的濃度把梯度摸索好,然后再優(yōu)化靈敏度,zui后調(diào)出所需的靈敏度、線性范圍。
③是不是酶濃度太高,導(dǎo)致zui后顯色結(jié)果都是高的?
④包被-酶標系統(tǒng)不匹配或者酶標的非特異反應(yīng)太強,或者酶標儀讀數(shù)范圍不夠,或者干脆酶標儀壞了。
⑤有條件的話,可以把酶免的蛋白系統(tǒng)移植到板式化學(xué)發(fā)光上,加完底物三分鐘讀數(shù),這樣可能比較適合你。
⑥酶是自己標的么,見過有人把酶給標壞了出現(xiàn)這種情況的,HRP的話,比例不要太高,酶掛的太多了也不好的。
⑦剛加完顯色劑時梯度明顯:顯色液是不是從高濃度向低濃度孔加的啊。
⑧蛋白系統(tǒng)靈敏度夠的話,顯色十分鐘就差不多了。
看到我公司的問題分析內(nèi)容后,許老師再贊上海滬鼎的服務(wù)效率好。以上內(nèi)容就是錢今天給大家?guī)淼男聦W(xué)期ELISA曲線問題解析,了解更多。