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操作過程中的問題造成假陽性
閱讀：1249 發(fā)布時(shí)間：2013-9-24操作過程中的問題造成假陽性
在常見的elisa檢測實(shí)驗(yàn)中，有很多的過程都會導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗，一點(diǎn)小小的誤差也不能盡人意，所有操作過程中一定要注意這些方面，保證實(shí)驗(yàn)成功。
3、1加樣
對于間接ELISA標(biāo)本一般都要進(jìn)行稀釋，如果加樣不準(zhǔn)就會造成誤差，尤其當(dāng)稀釋倍數(shù)大時(shí)，很小的誤差，會導(dǎo)致較大的相對誤差，使陰性（或弱陽性）標(biāo)本呈陽性（或陰性）。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。目前，大部分血站都已使用全自動酶免加樣系統(tǒng)處理標(biāo)本，可較好地避免以上誤差。
3、2洗滌
在ELISA中正確的洗滌是保證得到可重復(fù)結(jié)果的關(guān)健一步，應(yīng)引起操作者重視。無論是手工操作還是機(jī)器操作，得出不正確的結(jié)果常與不正確的洗滌有關(guān)，ELISA就是靠洗滌來達(dá)到分離游離和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過洗滌以消除殘留在板孔中沒能與固體抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)，以及在反應(yīng)過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
3、3 溫育
每種試劑都有其*反應(yīng)模式，其中溫度和溫育時(shí)間控制是重要因素。因孵育溫度高，反應(yīng)時(shí)間長，會造成整板本底高，陽性率高。溫育一般用濕盒或水浴，反應(yīng)板不宜疊放，以保證各板溫度都能迅速平衡，為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋。
3、4酶標(biāo)儀判讀
作為記錄測定結(jié)果的儀器，酶標(biāo)儀的性能穩(wěn)定與否，決定結(jié)果的可靠度。首先酶標(biāo)儀應(yīng)定期進(jìn)行保養(yǎng)，對濾光片要定期校正；其次酶標(biāo)儀波長設(shè)置要正確，使用雙波長，一個(gè)檢測波長，一個(gè)參比波長，以消除微孔板底部劃痕、不平、指印或液面高度差異造成的光干擾。此外，在用酶標(biāo)儀讀數(shù)時(shí)先擦試微孔板底部并壓平板條。由于各種酶標(biāo)儀性能有所不同。
以上四種方法都有可能在elisa試劑盒檢測上令結(jié)果不一樣，從而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗，我司技術(shù)在經(jīng)過多次實(shí)驗(yàn)中得出以上結(jié)論，所以elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)?zāi)芊癯晒θQ于多方面的因素，我司所售elisa試劑盒均可保證質(zhì)量，提供免費(fèi)技術(shù)指導(dǎo)及實(shí)驗(yàn)代測服務(wù)，為您節(jié)省時(shí)間，提高實(shí)驗(yàn)成功度，咨詢關(guān)于elisa試劑盒的任何問題。我們恭候您的光臨。