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乳酸脫氫酶基本化學(xué)反應(yīng)及常見測試辦法
閱讀：2727 發(fā)布時(shí)間：2013-7-29乳酸脫氫酶基本化學(xué)反應(yīng)及常見測試辦法
乳酸脫氫酶是一種糖酵解酶。乳酸脫氫酶存在于機(jī)體所有組織細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)，其中以腎臟含量較高。乳酸脫氫酶是能催化乳酸脫氫丙酮酸的酶，幾乎存在于所有組織中。同功酶有五種形式，即LDH－1（H4）、LDH-2（H3M）、LDH－3（H2M2）、LDH-4（HM3）及LDH-5（M4），可用電泳方法將其分離。LDH同功酶的分布有明顯的組織特異性，所以可以根據(jù)其組織特異性來協(xié)用診斷疾病。正常人血清中LDH2，>LDH1。如有心肌酶釋放入血則LDH1>LDH2，利用此指標(biāo)可以觀察診斷心肌疾病。
英文名稱：LAD；LDH；Lactic dehydrogenase（rabbit muscle）
其他名稱：L-乳酸脫氫酶；乳酸去氫酵素
CAS號：9001-60-9
級別：BR
分子量：約36000
活力：≥300u/mg protein
活力定義：One unit will reduce 1.0 μmole of pyruvate to L-
lactate per min at pH 7.5 at 37℃
濃度：≥5000u/ml
性狀：懸浮液。酶反應(yīng)：乳酸鹽+輔酶I＝丙酮酸鹽+還原輔酶I+H+ 。等
電點(diǎn)pI 4.6。在25℃,pH 5.0～11.0時(shí)穩(wěn)定；在pH小于5時(shí),120分鐘后沒
有活力（放置同樣時(shí)間,在pH 5.0時(shí)有100%活力,在pH 6.0時(shí)有84%活力）
用途：生化研究。丙酮酸鹽的檢定
保存：2～8℃
乳酸脫氫酶（1actate dehydrogenase，LDH）是輔酶I（NAD）依賴性脫氫酶，能氧化乳酸為丙酮酸，為無氧糖酵解途徑的標(biāo)志酶。硝基藍(lán)四唑鹽法顯示LDH活性的原理與顯示SDH活性的原理基本相同，只是需加用NAD，氫從反應(yīng)的還原型輔酶I（NADH）傳遞給四唑鹽，將其還原為甲脂。
1）孵育液配制
0．06mol/LPBS 0．25ml
1．0mol/LD，L乳酸鈉 0．1ml
0．4％NAD 0．1ml
0．4％NBT 0．25ml
0．1mol/LKCN 0．1ml
0．5mol/LMgCl： 0．1ml
蒸餾水 10ml
2）操作程序：
①固定：用預(yù)冷的2％多聚甲醛（0．1mol/LPBS，pH 7．4配制）灌注固定5分鐘；
②洗滌：用冷PBS灌流沖洗固定液；
③取材：取所需組織，用PBS洗3次；
④切片：冰凍切片或振動切片，裱于涂有黏附劑的載玻片上：
⑤孵育：在上述孵育液中，暗處反應(yīng)5分鐘，室溫下反應(yīng)30分鐘；
⑥封片：洗滌、脫水、甘油明膠封固和鏡檢。
3）結(jié)果：酶反應(yīng)陽性部位呈藍(lán)色。該酶對固定劑的耐受性較好，采用先固定后孵育，可保存結(jié)構(gòu)防止酶擴(kuò)散。為了防止定位異常，在底物中加入聚乙烯醇（PVA）或聚乙烯吡咯烷酮（PVP），可使底物黏稠度增加，防止反應(yīng)產(chǎn)物擴(kuò)散。
4）對照實(shí)驗(yàn)：除去孵育液中的底物，結(jié)果應(yīng)為陰性。
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