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軟瓊脂實(shí)驗(yàn)步驟新篇章
閱讀：3515 發(fā)布時(shí)間：2013-3-21軟瓊脂（soft agar）實(shí)驗(yàn)一般用來(lái)檢測(cè)細(xì)胞的集落形成能力?，F(xiàn)在這種方法越來(lái)越多的用于分離癌細(xì)胞，也可以用來(lái)確認(rèn)癌細(xì)胞是否具有癌化特性，為進(jìn)一步做腫瘤小鼠移植模型奠定理論基礎(chǔ)。該方法看似簡(jiǎn)單，但如果細(xì)節(jié)掌握不好，往往導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或數(shù)據(jù)缺乏說(shuō)服力。如果你曾經(jīng)在這個(gè)實(shí)驗(yàn)上栽了跟頭，請(qǐng)不妨在如下幾個(gè)方面進(jìn)行嘗試：
1.要確保在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所使用的瓊脂處于*液體狀態(tài)（>80℃），尤其是在做基底時(shí)，如果瓊脂凝固過(guò)快會(huì)導(dǎo)致基底不均一；
2. 做瓊脂基底是應(yīng)避免產(chǎn)生小氣泡，一旦有小氣泡產(chǎn)生，應(yīng)該立即將氣泡趕走；
3. 應(yīng)使用2倍濃度的培養(yǎng)基，并加入20%FBS 和2%的P/S；
4. 在制備上層時(shí)，混合液體需要有順序，一般為在同一個(gè)移液管中先吸取液態(tài)瓊脂，再吸取同體積的2倍濃度的培養(yǎng)基，zui后在吸取2倍體積的細(xì)胞懸液，這樣既可以保證瓊脂不立即固化，又可以有效避免細(xì)胞因溫度過(guò)高而燙死；
5. 因?yàn)樵搶?shí)驗(yàn)周期較長(zhǎng)，為避免過(guò)度蒸發(fā)而導(dǎo)致瓊脂裂解，需要保證小環(huán)境持久濕潤(rùn)，一般可在六孔板或培養(yǎng)皿下面墊上三到四層濕潤(rùn)的薄紙。
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