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在做ELISA實驗中，相信大家或多或少難免會出現(xiàn)一些狀況，就在上周五，小編就在貼吧看到有個吧友發(fā)帖問在做ELISA實驗，到顯色步驟結(jié)束后，酶標(biāo)板所有孔均無顏色。陽性對照不顯色。那么今天上海勁馬請咱技術(shù)人員給大家分析分析

 

原因分析：試劑已過有效期，或不同試劑盒組分混用，檢查試劑的組分及批號，確認(rèn)未過期以及所有組分均屬對應(yīng)的試劑盒。

 

對策：不同試劑盒或不同批號的試劑不能混用。                          

 

整板的黃板現(xiàn)象可能是由于錯加其他試劑造成，如同時操作兩對半試劑時，測HbsAb板用于測HBsAg等；實驗前檢查試劑的組分及批號，確認(rèn)所有組分均屬于對應(yīng)的試劑盒。如盛標(biāo)本的試管四周常有血痂，易脫落，應(yīng)遠(yuǎn)離酶標(biāo)板。

 

elisa試劑盒超過有效期的產(chǎn)品可能會產(chǎn)生很弱的信號；試劑盒沒有按規(guī)定進(jìn)行留存，受高溫影響；實驗前檢查試劑的組分及批號，確認(rèn)試劑未過期。孵育溫度應(yīng)控制在37-38℃，孵育時間嚴(yán)格按照說明書操作，保溫期內(nèi)不宜多開門，以免影響保溫。花板，一般是由于臨床標(biāo)本的收集、處理和留存方法不當(dāng)造成，放置時間(自然放置1~2h)及離心轉(zhuǎn)(3000r/min)、離心時間(15min)應(yīng)引起注意。

 

試劑、樣品用前未平衡至室溫從低溫冰箱中取出的試劑及樣品應(yīng)置室溫平衡，20分鐘左右。錯加、漏加試劑底物、顯色劑A或B嚴(yán)格按說明書的步驟操作，加完試劑后可觀察一下液面高度是否一致，以減少漏加現(xiàn)象。實驗結(jié)束后，陰陽性對照正常，質(zhì)控正常，但臨床標(biāo)本感覺顯色較弱，待測標(biāo)本中可能不含強(qiáng)陽性標(biāo)本，故結(jié)果可能是正常的，如有懷疑，可復(fù)檢標(biāo)本加入疊氮鈉作為防腐劑，酶免實驗中的標(biāo)本禁用疊氮鈉作為防腐劑，可選用 proclin、硫柳汞等其他防腐劑，陰陽性對照正常，但質(zhì)控、參考品或個別弱陽性標(biāo)本未能檢出