化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
檢測細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的方法有哪些?
閱讀：3229 發(fā)布時間：2021-1-25一、實時定量PCR檢測
實時熒光定量PCR （Quantitative Real-time PCR）是一種在DNA擴(kuò)增反應(yīng)中，以熒光化學(xué)物質(zhì)測每次聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法。通過內(nèi)參或者外參法對待測樣品中的特定DNA序列進(jìn)行定量分析的方法。Real-time PCR是在PCR擴(kuò)增過程中，通過熒光信號，對PCR進(jìn)程進(jìn)行實時檢測。由于在PCR擴(kuò)增的指數(shù)時期，模板的Ct值和該模板的起始拷貝數(shù)存在線性關(guān)系，所以成為定量的依據(jù)。但是，熒光定量PCR所檢測的是轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中待測基因的mRNA的表達(dá)水平，對于目的基因的蛋白表達(dá)水平不能夠檢測；
二、Wester Blot檢測
Western Blot又稱蛋白質(zhì)免疫印跡（免疫印跡實驗），其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細(xì)胞或者生物組織樣品進(jìn)行著色，并通過分析著色的位置和著色的深度獲得特定蛋白在所分析的細(xì)胞或者組織中表達(dá)情況的信息。Western Blot所檢測的是組織或者細(xì)胞中蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。
三、流式細(xì)胞術(shù)
流式細(xì)胞術(shù)（Flow Cytometry，F(xiàn)CM）是一種在功能水平上對細(xì)胞或者其他生物粒子進(jìn)行定量檢測和分析的檢測手段，它可以高速分析上萬個細(xì)胞，并能同時從一個細(xì)胞中檢測得到多個參數(shù)，與傳統(tǒng)檢測方法相比具有更加快速、準(zhǔn)確以及定量等特點。使用流式細(xì)胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染效率可以更加精que的確定轉(zhuǎn)染的效率，對轉(zhuǎn)染效率進(jìn)行量化。
四、熒光顯微鏡觀察
當(dāng)我們轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒DNA含有熒光蛋白基因是，可以通過熒光顯微鏡觀察的方法來確定轉(zhuǎn)染的效率，在熒光顯微鏡下，可以觀察到熒光的強弱以及熒光的效率。