化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
急,血清出現(xiàn)沉淀怎么辦?
閱讀：1305 發(fā)布時(shí)間：2020-9-10很多小伙伴買(mǎi)到血清的時(shí)候會(huì)出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象,什么是沉淀呢？沉淀會(huì)影響使用嗎？沉淀和血清質(zhì)量有關(guān)嗎？該如何處理沉淀呢？接下來(lái)和小編一探究竟吧！
1.什么是血清沉淀？
血清中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的沉淀，其成分有多種類(lèi)型，產(chǎn)生的原因有很多，主要有纖維蛋白、磷酸鈣還有一些其它成分。
① 纖維蛋白（Fibrin）
血清中肉眼可見(jiàn)的沉淀物大多屬于這一類(lèi)型。由于在生產(chǎn)過(guò)程中，血清采集、過(guò)濾（3 次 0.1 μm過(guò)濾）和灌裝處理都是在低溫條件下快速完成, 此時(shí)血清中纖維蛋白原（Fibrinogen）處于溶解狀態(tài)。但在解凍之后, 血清中纖維蛋白原往往會(huì)發(fā)生凝集，形成肉眼可見(jiàn)的沉淀。
下圖是血清因反復(fù)凍融而造成纖維蛋白原的凝集
② 磷酸鈣（Calcium Phosphate）
這是一種常見(jiàn)的沉淀成分，通常會(huì)造成血清出現(xiàn)云霧狀渾濁。當(dāng)產(chǎn)品在 37℃保存時(shí)，這種現(xiàn)象尤其明顯，在倒置顯微鏡下可觀察到小黑點(diǎn)的存在。這些小黑點(diǎn)在布朗運(yùn)動(dòng)的作用下四處游動(dòng)，常被誤認(rèn)為是微生物污染。
③ 其他成分（Other）
血清中的其他成分也會(huì)形成沉淀，例如膽固醇形成的油脂滴和其他蛋白沉淀等
2.血清沉淀會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng)嗎？
① 細(xì)胞生長(zhǎng)
我們?cè)诔鰪S前都會(huì)對(duì)血清進(jìn)行一系列質(zhì)檢測(cè)試，確保血清質(zhì)量達(dá)到嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)。血清測(cè)試和細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)也表明，其沉淀成分不會(huì)影響血清作為細(xì)胞培養(yǎng)添加物的表現(xiàn)。這一點(diǎn)得到了眾多客戶(hù)和其他血清供應(yīng)商的肯定。解凍之后, 血清中纖維蛋白原往往會(huì)發(fā)生凝集，形成肉眼可見(jiàn)的沉淀。
② 懷疑污染
磷酸鈣顆粒經(jīng)常會(huì)被當(dāng)成微生物污染而引發(fā)不必要的擔(dān)憂(yōu)。一般情況下，當(dāng)操作人員融化血清后注意到有霧狀渾濁時(shí)，常將其存放在 4℃冰箱中觀察，并考慮接下來(lái)是否繼續(xù)使用。但這樣會(huì)使沉淀進(jìn)一步增多，反而會(huì)使血清更加渾濁，進(jìn)而誤以為存在血清污染。并且，在倒置顯微鏡下，可在血清中觀察到四處游動(dòng)的小黑點(diǎn)（磷酸鈣顆粒的布朗運(yùn)動(dòng)），更容易使人誤以為存在微生物污染。
為防止這類(lèi)誤解的產(chǎn)生，我們不建議客戶(hù)培養(yǎng)血清來(lái)驗(yàn)證是否存在污染，而是將血清直接接種在細(xì)菌培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，以觀察是否有細(xì)菌的增殖。并且，進(jìn)行革蘭氏染色，并在油鏡（100 X 10 倍）下觀察可直接確認(rèn)是否存在微生物污染。
3.怎樣操作可以盡量避免沉淀出現(xiàn)？
① 解凍血清時(shí)，請(qǐng)按照所建議的逐步解凍法(-2℃至4℃至室溫)，若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃，實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。
② 解凍血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生
③ 請(qǐng)勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清會(huì)變得混濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。
④ 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無(wú)須做此步驟。
⑤ 若必須做血清的熱滅活，請(qǐng)遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高，時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻，都會(huì)造成沉淀物的增多。 血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理? 欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無(wú)菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾。但不建議以過(guò)濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞過(guò)濾膜。
4.出現(xiàn)血清沉淀該如何處理？
我們建議您采用2000 rpm 離心5分鐘，取上清使用就好，比過(guò)濾方便，不需要另外準(zhǔn)備濾心和針筒，又不容易污染。
5.總 結(jié)：
血清產(chǎn)品中出現(xiàn)沉淀屬于常見(jiàn)現(xiàn)象，但不會(huì)影響血清的品質(zhì)，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)而言也是沒(méi)有任何問(wèn)題的，大家可以放心使用！
