您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)
會(huì)員.png)
8
免疫親和柱的原理與作用過程
一、免疫親和柱(Immunoprecipitationcolumn)是一種常用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，用于從混合物中分離出特定的蛋白質(zhì)或其他分子。免疫親和柱通過利用抗體與特定分子的相互作用來實(shí)現(xiàn)選通性緩沖。
二、作用過程：
1.制備樣品：將要檢測(cè)的生物分子從細(xì)胞提取物、組織或其他樣品中提取出來。這個(gè)步驟可能需要不同的方法，具體取決于你感興趣的生物分子。
2.準(zhǔn)備免疫親和柱：選擇一個(gè)適當(dāng)?shù)拿庖哂H和柱，然后按照該柱的說明書進(jìn)行準(zhǔn)備。大多數(shù)免疫親和柱都需要在使用前進(jìn)行條件化，并且需要用緩沖液洗滌以去除未結(jié)合的成分。
3.加入樣品：將制備好的樣品加入到免疫親和柱中，使其流過柱。此時(shí)，免疫親和柱內(nèi)的抗體將會(huì)識(shí)別并結(jié)合目標(biāo)蛋白質(zhì)，并將其捕獲到柱內(nèi)。
4.洗滌柱子：用帶有鹽和洗滌劑的緩沖液洗滌柱子，以去除非特異性結(jié)合，并使免疫親和柱上的目標(biāo)蛋白質(zhì)保持其穩(wěn)定性。
5.瞬時(shí)沉淀：通過在免疫親和柱中加入一個(gè)低pH緩沖液，可以使目標(biāo)蛋白從抗體中釋放出來。此時(shí)，目標(biāo)蛋白質(zhì)會(huì)形成沉淀，并可用于后續(xù)分析。
6.分析樣品：將瞬時(shí)沉淀的樣品用于下一步分析。這可能是Westernblot、質(zhì)譜或其他技術(shù)，具體取決于你要檢測(cè)的生物分子。
三、因?yàn)槊庖哂H和柱的高特異性，使用免疫親和柱凈化可以獲得純凈的樣品提取物，如同標(biāo)準(zhǔn)品般純凈的提取物可以用相對(duì)簡(jiǎn)單常見的檢測(cè)方式獲得準(zhǔn)確的定量檢測(cè)結(jié)果，這對(duì)于微量甚至痕量分析很重要。在樣品凈化過程中，使用親和柱同時(shí)避免了常規(guī)液液萃取中大量有機(jī)溶劑的使用，加強(qiáng)了對(duì)實(shí)驗(yàn)員的保護(hù)。