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簡(jiǎn)單了解鼠抗T2-毒素單克隆抗體的常見(jiàn)問(wèn)題
鼠抗T2-毒素單克隆抗體是由多種鐮刀菌產(chǎn)生的一種霉菌毒素。主要污染小麥、大麥、玉米等糧食作物及其制品，對(duì)人類健康及畜牧業(yè)構(gòu)成了較大危害。T2-毒素主要影響血液，肝臟，腎臟，胰腺肌肉及淋巴細(xì)胞的功能，T2-毒素中毒后的一般臨床癥狀為厭食、嘔吐、腹瀉、生長(zhǎng)停滯、繁殖和神經(jīng)機(jī)能障礙等。該抗體可運(yùn)用于ELISA、膠體金、免疫親和柱層析等免疫檢測(cè)。
鼠抗T2-毒素單克隆抗體的常見(jiàn)問(wèn)題：
1.包被抗體或抗原不適，易產(chǎn)生陽(yáng)性值較小，或產(chǎn)生變異，即跳管現(xiàn)象。
2.用抗血清不純化，或純化程度太低的抗體包被，則陽(yáng)性值較小，或沒(méi)有陽(yáng)性梯度。
3.封閉不好或標(biāo)記物過(guò)濃可產(chǎn)生對(duì)照值較高。
制備并鑒定抗T-2毒素單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株，以期為T-2毒素的快速檢測(cè)提供有力的抗體工具。方法：采用琥珀酸酐法將T-2毒素活化為T-2HS,T-2HS在DCC與NHS作用下與牛血清白蛋白(BSA)或卵清白蛋白(OVA)偶聯(lián)合成*抗原。以T-2HS-BSA為抗原，免疫BALB/c小鼠，用ELISA篩選、建立分泌抗T-2毒素抗體的雜交瘤細(xì)胞株。測(cè)定單抗免疫球蛋白亞類及單抗效價(jià)，用間接競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)單克隆抗體細(xì)胞株的特異性。結(jié)果：建立了1株穩(wěn)定分泌抗T-2毒素抗體的雜交瘤細(xì)胞株T-1B3，該細(xì)胞株所分泌的單隆抗體Ig亞類為IgG1，ELISA檢測(cè)結(jié)果表明抗T-2毒素抗體可以與T-2毒素發(fā)生特異性反應(yīng)，工作濃度為1:6.5×104,IC50為3.6ng/ml。該抗體與HT-2毒素的交叉反應(yīng)為65.9%,與黃曲霉毒素?zé)o交叉。結(jié)論：制備出能分泌具有較高特異性和親和力的抗T-2毒素單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。