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淺析黃曲霉毒素免疫親和柱的提取步驟和凈化步驟
1、黃曲霉毒素免疫親和柱的適用范圍：
適合于陳皮、胖大海、僵蠶、酸棗仁、桃仁等中藥材品種。*執(zhí)行2010版中國(guó)藥典附錄IXV黃曲霉毒素測(cè)定法進(jìn)行檢測(cè)。
2、黃曲霉毒素免疫親和柱的提取步驟：
取供試品粉末約15.0g(過二號(hào)篩)，精密稱定，加入氯化鈉3.0g，置于均質(zhì)瓶中，精密加入70%甲醇溶液75.0mL，高速攪拌2分鐘（攪拌速度大于11,000轉(zhuǎn)/分），離心5分鐘(離心速度2500轉(zhuǎn)/分)，定性濾紙過濾、然后精密量取上清液15.0mL，置50ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，量取續(xù)濾液20.0mL，待凈化。
混合對(duì)照品溶液的制備：精密量取黃曲霉毒素混合標(biāo)準(zhǔn)品（黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2標(biāo)示濃度分別為1.0μg/ml、0.3μg/ml、1.0μg/ml、0.3μg/ml）0.5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，作為儲(chǔ)備液。
3、黃曲霉毒素免疫親和柱的凈化步驟：
1）回溫解凍：提前半個(gè)小時(shí)將黃曲霉毒素免疫親和柱從冰箱拿出常溫解凍；
2）上樣：準(zhǔn)確移取20mL提取好的樣品溶液注入免疫親和柱，使溶液以1滴/S的速度通過免疫親和柱，直至2mL-3mL空氣通過柱體，棄去流出液；
3）淋洗：用20mL水淋洗免疫親和柱，流速為1滴/s--2滴/s，淋洗兩次。直至空氣進(jìn)入免疫親和柱，直至2mL-3mL空氣通過柱體，棄去全部的流出液，抽干小柱；
4）洗脫：準(zhǔn)確加入1.0mL甲醇洗脫，流速約為1滴/s，收集全部的洗脫液于干凈的離心管中，用甲醇-乙腈-水(40:18:42)定容至2mL，供液相色譜測(cè)定。