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細胞技術(shù)專題：小鼠腹腔巨噬細胞原代培養(yǎng)實驗
標簽：小鼠腹腔巨噬細胞原代培養(yǎng)小鼠腹腔巨噬細胞原代培養(yǎng)可以：（1）用于細胞保種；（2）用于分子生物學研究；（3）用于基因治療研究。實驗方法腹腔取材法實驗方法原理巨噬細胞屬免疫細胞，有多種功能，是研究細胞吞噬、細胞免疫和分子免疫學的重要對象。巨噬細胞容易獲得，便于培養(yǎng)，并可進行純化。巨噬細胞屬不繁殖細胞群，在條件適宜下可生活2－3周，多用做原代培養(yǎng)，難以長期生存。巨噬細胞也建有無限細胞系，大多來自小鼠，如P331、S774A.1、RAW309Cr.l等，均獲惡性，培養(yǎng)中呈巨噬細胞形態(tài)和吞噬功能，易 -
正常培養(yǎng)的細胞自噬活性很低，不適于觀察，因此，必須對自噬進行人工干預和調(diào)節(jié)，經(jīng)報道的工具藥有：一、自噬誘導劑(1)BredeldinA/Thapsigargin/Tunicamycin：模擬內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激(2)Carbamazepine/L-690，330/LithiumChloride（氯化鋰）：IMPase抑制劑（即Inositolmonophosphatase，肌醇單磷酸酶）(3)Earle's平衡鹽溶液：制造饑餓(4)N-Acetyl-D-sphingosine（C2-ceramide）：C
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一、原理培養(yǎng)的細胞在一般條件下要求有一定的密度才能生長良好，所以要進行細胞計數(shù)。計數(shù)結(jié)果以每毫升細胞數(shù)表示。細胞計數(shù)的原理和方法與血細胞計數(shù)相同。在細胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細胞，總細胞中活細胞所占的百分比叫做細胞活力，由組織中分離細胞一般也要檢查活力，以了解分離的過程對細胞是否有損傷作用。復蘇后的細胞也要檢查活力，了解凍存和復蘇的效果。用臺盼蘭染細胞，死細胞著色，活細胞不著色，從而可以區(qū)分死細胞與活細胞。利用細胞內(nèi)某些酶與特定的試劑發(fā)生顯色反應，也可測定細胞相對數(shù)和相對活力。二、儀器
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細胞技術(shù)專題：新生大鼠心肌細胞原代培養(yǎng)實驗
標簽：新生大鼠心肌細胞原代培養(yǎng)新生大鼠心肌細胞原代培養(yǎng)可以：（1）細胞保種；（2）用于細胞形態(tài)研究；（3）應用于臨床研究。實驗方法胰酶消化法實驗方法原理將大鼠的心肌細胞從機體中取出，經(jīng)胰酶、螯合劑（常用EDTA）處理，分散成單細胞，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細胞得以生存、生長和繁殖。實驗材料SD乳鼠試劑、試劑盒低糖DMEM、胰酶EDTA青鏈霉素碳酸氫鈉液新生牛血清谷氨酰胺D-Hank's液新潔爾滅碘酒酒精儀器、耗材鋁盒眼科直剪眼科彎剪眼科直鑷眼科彎剪玻璃培養(yǎng)皿廣口瓶棉球燒杯錐形瓶離心管磁力攪拌器攪 -
目的：通過特異性阻斷PI3K和mTOR，觀察HepG2和Hep3B細胞株P(guān)I3K/Akt/mTOR信號通路活性及生物學行為的改變，探討相關(guān)的分子機制。方法：在培養(yǎng)的HepG2、Hep3B人肝癌細胞株和人正常肝細胞株QSG-7701上，以免疫印跡方法（Westernblot）檢測各細胞株中PI3K（p110α亞單位）、PTEN、pAkt（S473，T308）和p-mTOR（S2448）的表達情況；分別用PI3K抑制劑LY294002（50μmol/ml）和mTOR抑制劑Rapamycin（RAPA
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標簽：細胞原代培養(yǎng)細胞原代培養(yǎng)可以：（1）為研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段；（2）為傳代培養(yǎng)創(chuàng)造條件；（3）服務于臨床實踐，用于藥物篩選等。實驗方法胰酶消化法組織塊直接培養(yǎng)法實驗方法原理將動物機體的各種組織從機體中取出，經(jīng)各種酶（常用胰蛋白酶）、螯合劑（常用EDTA）或機械方法處理，分散成單細胞，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細胞得以生存、生長和繁殖，這一過程稱原代培養(yǎng)。因此，較為嚴格地說是指成功傳代之前的培養(yǎng)，此時的細胞保持原有細胞的基本性質(zhì)，如果是正常細胞，仍然保留二倍體數(shù)。但實際
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細胞技術(shù)專題：小鼠胚胎成纖維細胞（MEF）原代培養(yǎng)實驗
標簽：小鼠胚胎成纖維細胞培養(yǎng)小鼠胚胎成纖維細胞(MEF)原代培養(yǎng)可以：（1）用于細胞保種；（2）用于分子生物學研究；（3）用于基因治療相關(guān)研究。實驗方法胰酶消化法1胰酶消化法2實驗方法原理將小鼠的胚胎成纖維細胞（MEF）從機體中取出，經(jīng)胰酶、螯合劑（常用EDTA）處理，分散成單細胞，置MEF生長培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細胞得以生存、生長和繁殖。實驗材料孕鼠試劑、試劑盒PBSEDTA胰酶MEF生長培養(yǎng)基FBS高糖DMEM儀器、耗材眼科直剪眼科直鑷眼科彎鑷玻璃平皿3尼龍濾網(wǎng)離心管手術(shù)刀片實驗步驟一、實驗材料 -
細胞技術(shù)專題：流式細胞儀檢測細胞凋亡：PI單染色法
一、基本原理其原理主要是根據(jù)細胞凋亡時在細胞、亞細胞和分子水平上所發(fā)生的特征性改變。這些改變包括細胞核的改變、細胞器的改變、細胞膜成分的改變和細胞形態(tài)的改變等，其中細胞核的改變特征性，主要包括以下幾個方面：1、細胞核的改變由于凋亡細胞核的改變，造成各種染色體熒光染料對凋亡細胞DNA可染性發(fā)生改變。研究表明，用各種染色體熒光染料對經(jīng)固定的凋亡細胞進行染色，其DNA可染性降低。許多學者把這種DNA可染性的降低認為是凋亡細胞的標志之一。2、光散射特性凋亡細胞形態(tài)上的改變影響它們的光散射特性。在流式細胞
