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          DNA實驗技術:凍融法回收DNA片段操作步驟

          2013-8-6  閱讀(1484)

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          1.  紫外燈下仔細切下含待回收DNA的膠條,將切下的膠條(小于0.6g)搗碎,置于1.5ml離心管中;

          2.  加入等體積的Tris-HCl飽和酚(pH 7.6),振蕩混勻;

          3.  -20℃放置5-10min;

          4.  4℃離心10000g×5min,上層液轉(zhuǎn)移置另一離心管中;

          5.  加入1/4體積H2O于含膠的離心管中,振蕩混勻;

          6.  -20℃,放置5-10min;

          7.  4℃離心10000g×5min,合并上清液;

          8.  用等體積酚/氯仿、氯仿分別抽提一次,取上清;

          9.  加入1/10體積3M NaAc(pH 5.2)、2.5倍體積預冷的無水乙醇,混勻;

          10. -20℃,靜置30min;

          11. 4℃離心13000g×10min,棄上清,75%乙醇洗沉淀1-2次,晾干;

          12.  加適量H2O或TE溶解沉淀。

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