CY3標(biāo)記-Recombinant Protein A，重組蛋白A

瑞禧提供CY3修飾與標(biāo)記的蛋白，人血清白蛋白HSA、鏈霉親和素Streptavidin、標(biāo)記親和素 Avidin、胰島素 Insulin、偶聯(lián)刀豆球蛋白A Concanavalin A、標(biāo)記鬼筆環(huán)肽 Phalloidin、CY3-重組蛋白A Recombinant Protein A、標(biāo)記雞卵白蛋白 Ovalbumin、修飾人轉(zhuǎn)鐵蛋白 Transferrin、牛血清白蛋白BSA、，純度大于99%，可以提供COA和核磁、HPLC圖譜報(bào)告，2周內(nèi)如遇質(zhì)量問(wèn)題。

CY3-人轉(zhuǎn)鐵蛋白      CY3-Transferrin

CY3-泛素 CY3-Ubiquitin

CY3-琥珀?；€孔傶血蘭蛋白 CY3-Succinylated Keyhole Limpet

CY3-鑰孔傶血蘭蛋白 CY3-Keyhole Limpet Hemocyanin(KLH)

CY3-肌鈣蛋白I

CY3-C-反應(yīng)蛋白

CY3標(biāo)記纖維蛋白

CY3-Proteinase K  標(biāo)記蛋白K

CY3-Lysozyme(溶菌)

CY3-Lyticase (10U/μl)溶壁

CY3-Snailase偶聯(lián)蝸牛

CY3-Mouse Serum Albumin  標(biāo)記小鼠血清白蛋白

CY3-Canine Serum Albumin 修飾犬血清白蛋白

CY3-Wheat Gliadin標(biāo)記小麥醇溶蛋白

CY3-鬼筆環(huán)肽 CY3-Phalloidin

CY3-玉米蛋白CY3-Zein

CY3-魚精蛋白硫酸鹽CY3-Protamine sulfate salt

CY3-牛血紅蛋白CY3-Hemoglobin from bovine blood Hemoglobin

CY3-γ-球蛋白γ-Globu lins from bovine blood

CY3-牛纖維蛋白原()，CY3-Fibrinogen

CY3熒光染料可以用于標(biāo)記不同的目標(biāo)分子：

• 可在有機(jī)溶劑中溶解的蛋白質(zhì)

• 抗體 (use 5-10% of DMSO/DMF)

• DNA和寡核苷酸

• 多肽

• 其他小分子，包括用小分子及

CY3標(biāo)記-Recombinant Protein A，重組蛋白A

菁染料琥珀酰亞胺酯（Cy3 NHS）的標(biāo)記蛋白步驟：

菁染料和生物分子的比例F/P=4～12之間熒光度， F/P值過(guò)熒光探針會(huì)自我淬滅并影響生物分子的生物活性，標(biāo)記生物分子是用單琥珀酰亞胺酯，但是用雙修飾的CyDye NHS并沒有發(fā)現(xiàn)交聯(lián)。CyDye NHS標(biāo)記抗體在pH (8.5～9.4)時(shí)10分鐘F/P可達(dá)5～6，而在pH 7.0幾乎不反應(yīng)。我們用不同比例的Cy3標(biāo)記anti-glutathione-S-transferase(GST)多克隆抗體發(fā)現(xiàn)用1:1，5:1，10:1 和 20:1標(biāo)記時(shí)得到的F/P值分別是 0.28:1，1.16:1，2.3:1和4.6:1。

操作步驟：

一、 水溶性Cy3 NHS ester標(biāo)記anti-GST多克隆抗體

上買到的抗體如果含有其它蛋白（例如serum albumin或gelatin等）或帶氨基的緩沖液會(huì)影響標(biāo)記，在標(biāo)記前需純化。

1. 在1 L 0.15 M NaCl 溶液中透析anti-GST抗體(濃度為 0.5 mL at3 mg/mL)，常溫透析4小時(shí)。

2. 在4°C用鮮的1 L 0.15 MNaCl 溶液再透析過(guò)夜。

3. 天用1 L 0.1 M NaHCO3 (pH 8.3)透析4小時(shí)。

4. 用0.22 μm注射器過(guò)濾頭過(guò)濾抗體溶液。

5. 用0.1 M NaHCO3 稀釋少量的抗體，在280nm處測(cè)其紫外吸收值計(jì)算標(biāo)記抗體的總量 （IgGantibody摩爾吸光系數(shù)170 000 M-1 cm-1 at 280 nm).

6. 用DMSO配置Cy3 NHS (MW765.95) 溶液濃度為10 mg/mL；計(jì)算所需體積以得到想要的CyDye NHS 和抗體的比值(例如20:1)，然后慢慢將其加入到抗體溶液中，同時(shí)在暗處常溫緩慢攪拌45分鐘。

7. 用1 L 0.15 M NaCl 溶液常溫避光透析4小時(shí)除去未標(biāo)記上的Cy3。

8. 在4°C用鮮的1 L 0.15 MNaCl 溶液再避光透析過(guò)夜。

9. 用1 L of 0.01 M PBS/ 0.01% 溶液常溫避光透析4小時(shí)， 在4°C常溫避光再次透析過(guò)夜。

10. 用0.22 μm注射器過(guò)濾頭過(guò)濾抗體溶液。

11. 用0.01 M PBS/0.01 %整數(shù)倍稀釋標(biāo)記抗體溶液，測(cè)量280nm（蛋白）和552nm（Cy）處的紫外可見吸光度。

12. 產(chǎn)品冷凍干燥成粉末或在0.01 M PBS/ 0.01% 溶液中，-20℃避光儲(chǔ)存。

F/P計(jì)算：

Cy3在552nm摩爾吸光系數(shù)為150 000M-1cm-1；此蛋白在280nm的摩爾吸光系數(shù)為170 000

M-1cm-1；不同蛋白的摩爾吸光系數(shù)不一樣；Cy3 染料本身在280 nm 的吸收是552nm處的8%。

按以下公式計(jì)算F/P值。

[Cy3] = A552/150000

[antibody] = {A280 - (0.08×A552)}/170000

F/P final= [Cy3]/[antibody]= {1.13×A552}/{A280 - (0.08×A552)}

瑞禧提供CY3標(biāo)記的蛋白產(chǎn)品：

CY3-血球凝集素 CY3-Hemagglutinin

CY3-Annexin 膜聯(lián)蛋白

CY3-金黃色葡萄球菌蛋白A（r-SPA）

CY3-鏈球菌蛋白G（r-SPG）

CY3-耐堿性蛋白A（r-ATPA）

CY3-Proteinase K

CY3-Protein A標(biāo)記蛋白K

CY3-Heparin 修飾素

CY3-Casein 修飾酪蛋白

CY3-Actin標(biāo)記肌動(dòng)蛋白

CY3-Histone 修飾組蛋白

CY3-Hemoglobin 修飾血紅蛋白

CY3-Mucin 標(biāo)記粘蛋白

CY3-Nucleohistone 標(biāo)記核酸組蛋白/核仁蛋白

CY3-lactalbumin標(biāo)記乳白蛋白

CY3-Lipopolysaccharides 標(biāo)記脂多糖

CY3-Lectins標(biāo)記凝集素

CY3-Lactoferrin修飾乳鐵蛋白

CY3-Azo-Casein修飾偶氮酪蛋白

CY3-Laminin 標(biāo)記層粘蛋白

CY3-Keratin azure修飾天青角蛋白

CY3-Protamine標(biāo)記魚精蛋白

CY3-Ferredoxin 修飾鐵氧還蛋白

CY3修飾載脂蛋白E

CY3-觸珠蛋白

Cyanine3，CY3染料是近紅外熒光染料中較的一類熒光染料，和組織的自發(fā)熒光在近紅外波段小，能提供的特異性和靈敏度，菁染料是二個(gè)非區(qū)域電荷的氮原子通過(guò)聚合搭橋的方式形成的一種分子，以下圖片*詮釋：

CY3菁染料是近紅外熒光染料中較的一類熒光染料，統(tǒng)的可見光染料相比有的。由于和組織的自發(fā)熒光在近紅外波段小，因此在檢測(cè)復(fù)雜生物時(shí)，近紅外染料能提供的特異性和靈敏度。同時(shí)，由于光波在近紅外區(qū)段的組織透過(guò)性好。菁染料的摩爾吸光系數(shù)在熒光染料中是的。

以上蛋白還可以用CY5/CY5.5/CY7/CY7.5/ICG/IR-825/Comarin/Bodipy/熒光量子點(diǎn)/AuNRs納米金/HRPFITC/Rhodamine/NHS/氨基NH2/Biotin/疊氮N3/醛基CHO/巰基SH/馬來(lái)酰亞胺MAL/炔烴Alkyne/DBCO/PEG/FITC/TRITC/Biotin/thiol修飾/標(biāo)記

溫馨提示：用于科研哦，不能用于人體、開發(fā)、和其他商業(yè)用途