辣根過氧化物(HRP)在分子生物學(xué)中用于檢測(cè)復(fù)合物和生物靶標(biāo)，如蛋白質(zhì)、碳水化合物和核酸。HRP通常與抗體、鏈霉親和素或其他蛋白質(zhì)結(jié)合，將一些既易測(cè)定又具有度性的物質(zhì)如HRP，F(xiàn)ITC，Biotin等標(biāo)記到特異性抗體分子上，可以通過這些標(biāo)記物的增放大效應(yīng)來顯示或定量反應(yīng)中抗原或抗體的性質(zhì)與含量。

過氧化物（HRP）標(biāo)記單克隆抗體的步驟包含：

1.透析膜依次浸泡于50%乙醇1h，10 mmol/L NaHCO31h, 1 mmol/L EDTA 1 h,在蒸餾水中洗兩次并放于含0.01% (m/V)疊氮鈉的0. 1 mol/L磷酸鈉緩沖液，于4℃保存。

2.≥1 mg/ml抗體溶液(A280=1. 44 mg IgG/ml)對(duì)2L 0.1 mol/L pH 6.8的磷酸鈉緩沖液透析，于4℃緩慢攪動(dòng)下過夜。

3.10mgHRP溶解于1ml0.1mol/LpH9.2的碳酸鹽緩沖液，取0.25ml加入0.25ml配制的1.71 mg/ml NaIO4溶液中，蓋緊混勻，于室溫下避光放置2h。

4.取1ml透析后的抗體溶液和0.25g SephadexG-25加至0.5mlHRP/NaIO4混合液中。用玻璃棉塞緊巴斯德吸管管尖并用Parafilm封口膜封好。將抗體/葡聚糖凝膠/HRP混合物加人巴斯德吸管，室溫下避光放置3h。

5.柱子用0.75ml碳酸鹽緩沖液洗脫偶聯(lián)物。加38μl5mg/mlNaBH4溶液至洗脫物中，室溫下避光孵育30min。再加112μl 5mg/ml NaBH4溶液繼續(xù)孵育60min。

6.加0.9ml飽和硫酸銨溶液，于4℃下溫和攪拌30min。于4℃，10000g離心15min。

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