熒光探針DID/DiI/Dio/DIR標(biāo)記脂質(zhì)體-瑞禧

DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料，可以用來(lái)染膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。

當(dāng)與膜結(jié)合后其熒光度增，這類(lèi)染料有著很的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)。一旦對(duì)染色，這類(lèi)染料在整個(gè)膜上擴(kuò)散，佳濃度時(shí)可以使整個(gè)膜染色。

它們熒光顏色不同：

DiI(橙色熒光)，

DiO(綠色熒光)，

DiD(紅色熒光)

DiR (深紅色熒光)

這使得他們可以用來(lái)對(duì)活進(jìn)行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分別用標(biāo)準(zhǔn)的 FITC和TRITC的濾光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激發(fā)，有著比DiI長(zhǎng)的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)，在和組織染色中有。 DiR的紅外熒光可以穿透和組織，在活體成像中用來(lái)示蹤。

DiD(紅色熒光)

分子式：C61H99ClN2O4
分子量：959.91
外觀：紫色或深藍(lán)色固體
純度：≥95%
Ex/Em：644/665nm（甲醇）
溶解性：溶于DMF，DMSO，甲醇

結(jié)構(gòu)式

DiR (深紅色熒光)

分子式：C63H101IN2
分子量：1013.39g/mol
外觀：藍(lán)色至深藍(lán)色固體
純度：≥95%（HPLC）
Ex/Em：750/780 nm（甲醇）
溶解性：溶于DMF，DMSO，甲醇
保存：-20℃避光干燥保存，期二年。

結(jié)構(gòu)式

DiI(橙色熒光)

分子式：C59H97ClN2O4

分子量：933.88

純度：≥98%（TLC）

Ex/Em：549/565 nm

外觀：紅色至暗紅色，紫色至深紫色粉末

溶解性：DMF，DMSO，甲醇

保存條件：-20℃避光保存，一年。

光譜

DiO(綠色熒光)

分子式：C53H85ClN2O6

分子量：881.7

純度：≥98%（TLC）

Ex/Em：549/565 nm

外觀：綠色粉末

溶解性：DMF，DMSO，甲醇

保存條件：-20℃避光保存，一年。

光譜

使用方法
1. DiD，DiO，DiI，DiR和DiS膜染色液制備
(1)配置DMSO或EtOH 儲(chǔ)存液：儲(chǔ)存液用 DMSO或EtOH配置濃度1～5 mM。
注意：未使用的儲(chǔ)存液保存在-20 oC，避免反復(fù)凍融。
(2)工作液制備：用合適的緩沖液(如：無(wú)血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS)稀釋儲(chǔ)存液，配制濃度為1～5 µM的工作液。
注意：工作液的終濃度是根據(jù)不同和實(shí)驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn)來(lái)配制。可以從濃度的十倍以上尋找佳條件。
2. 懸浮染色
(1)懸浮密度為 1 × 106/mL加入到工作液中。
(2)在37 ℃培養(yǎng) 2～20分鐘，不同的佳培養(yǎng)時(shí)間不同。
(3)染色試管在1000～1500轉(zhuǎn)離心5分鐘。
(4)傾倒上清液，再次緩慢加入預(yù)溫37℃的培養(yǎng)液。
(5)重復(fù)(3)，(4)步驟兩次以上。
3. 粘壁的染色
(1)使粘壁的在無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)。
(2)從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過(guò)量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的中。
(3)在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋。
(4)在37 ℃培養(yǎng) 2～20分鐘，不同的佳培養(yǎng)時(shí)間不同。
(5)吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋，培養(yǎng)5～10分鐘，然后吸干培養(yǎng)基。
4. 顯微鏡檢測(cè)
(1)DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見(jiàn)表1。
(2)多色染料的同時(shí)檢測(cè)，濾光器按照以下設(shè)定：
a) DiI和DiO=Omega XF52，Chroma 51004;
b) DiI和DiD=Omega XF92，Chroma 51007;
c) DiI，DiO和DiD=Omega XF93，Chroma 61005
5. 流式儀的檢測(cè)
DiD，DiO，DiI，DiR和DiS 染色的可以分別用的FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3和FL4流式儀檢測(cè)。

儲(chǔ)存條件：DiR碘化物-20℃干燥避光保存，期一年。

溫馨提示：用于科研，不能用于人體（BYZ 2021.9）