試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
商品介紹:
測(cè)定意義 PDH(EC 4.1.1.1)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是丙酮酸脫氫酶復(fù)合體(PDHC)催化丙酮酸氧化脫羧的限速酶,催化丙酮酸脫梭生成羥乙ji-TPP,把糖酵解和三羧酸循環(huán)連接起來(lái)。 測(cè)定原理PDH催化丙酮酸脫氫,同時(shí)還原WST-8產(chǎn)生黃色物質(zhì),從而導(dǎo)致450nm光吸收的增加??梢姺止夤舛扔?jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
商品屬性:
NAD+和NADH的提?。?/span>
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提取:按照血清(漿)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提取: NAD+的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提取:按照組織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提取: NAD+的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2?!鰽空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4?!鰽測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。
5-羥色鹽鹽(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Potassium bicarbonate轉(zhuǎn)錄因子E2F-2抗體包裝500g
6'''-阿魏酰斯皮諾英文名: Sodium dodecanesulfonate內(nèi)皮受體蛋白酪激抗體包裝250mg
6''-O-二?;玖夏拒沼⑽拿?Theophylline酪蛋白激受體B2抗體包裝1g
6''-二沙苑子苷單酯英文名: Cellulase磷化雌激受體ER alpha 抗體包裝5g
6'-O-β-D-葡萄糖基龍膽苦苷英文名: Chondroitin sulfate重組增強(qiáng)型綠色熒光蛋白抗體包裝25ml
6'-O-β-D-芹糖獐芽菜苷英文名: Isonicotinic acid雌激受體α抗體(用于western blot)包裝5ml
6,7,4'-三羥基異黃英文名: L-Malic acid雌激受體α/β抗體包裝25g
6-氧基二氫血根堿英文名: Proteinase K Solution, 20 mg/ml自分泌運(yùn)動(dòng)因子抗體包裝5g
6-氧基山柰-3-O-蕓香糖苷英文名: Poly-L-lysine solution ( 0.1%)酪蛋白激A3受體抗體包裝100ml
6-姜(姜辣)英文名: Tetracycline hydrochloride solution, 50 mg/ml, sterileEHM2蛋白抗體包裝1g
6-姜烯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: D-Glucose-6-phosphate, disodium, dihydrate磷化真核翻譯起始因子4E抗體包裝1g
6-羥基(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Sodium succinate翻譯延伸因子EF-1a抗體包裝5g
6-基異麥冬黃烷A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Hemoglobin磷化雌激受體α抗體包裝1g
7,4'-二羥基黃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: PEG 10000磷化表皮生長(zhǎng)因子受體抗體包裝1g
7,8-二氫生物蝶呤英文名: DL-Malic acid磷化絲裂原活化蛋白激1抗體包裝5g
JCM3170=ATCC27875=CBS420.74=CECT3304=DSM4資源名稱: 披發(fā)糖多孢菌披發(fā)亞種 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品髓性核分化抗原試劑盒肉豆蔻;Myristicin
瓦克青霉Penicillium│waksmanii 質(zhì)量規(guī)格:純度大于99%,R構(gòu)型髓系觸發(fā)受體-1試劑盒忍冬苷;Lonicerin
ATCCBAA-482=CCM7143=CIP106688=DSM15638=NC資源名稱: 低溫乳桿菌 質(zhì)量規(guī)格:>99%髓鞘相關(guān)糖蛋白抗體試劑盒日蟾蜍他靈;Gamabufotalin
丙酮酸脫氫酶(PDH)測(cè)試盒100管/96樣枯草芽孢桿 2--5-吡啶酪蛋白激受體ErbB4Elisa
奇異鏈霉 (S)-N-芐氧羰基-3-氨基-3-苯基-1-磷酸化酪蛋白激受體ErbB2Elisa
芽孢桿屬 1-辛烯-3-乙酸酯磷酸化酪蛋白激受體ErbB4Elisa
釀酒酵母 吡咯并[2,3-D]嘧啶-4(氫)-酮SMO同系物Elisa
球孢白僵 2,3,5-三氟芐γ分泌Elisa
灰黃淺黃酵母 2,4-二甲基吡咯-3,5-二羧酸乙酯鈣粘連蛋白Elisa
瘡痂病鏈霉 2,3,5-三氟苯乙鎂離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1Elisa
Corynebacterium sp. 4-溴-alpha-苯乙趨化Elisa
薄層屬 1H-吡咯并[2,3-C]吡啶-2-羧酸乙酯膽固-25-羥化Elisa
總狀毛霉 1,1,2-氧基乙烷載脂蛋白MElisa
土壤短芽胞桿 Belleau's試劑法尼酯X受體Elisa
米根霉 -1-乙酸肝三酰甘油脂肪Elisa
頭孢霉 索那新果糖激Elisa
黑曲霉 2-(苯磺酰基)吡啶抗凝血原抗體Elisa
迂回殼囊孢 環(huán)己基肼鹽酸鹽蛋白酪磷酸Elisa