試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
商品介紹:
測(cè)定意義 脂蛋白酯酶是脂肪細(xì)胞、心肌細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞、乳腺細(xì)胞及巨噬細(xì)胞等實(shí)質(zhì)細(xì)胞合成的一種酶,可催化甘油三脂水解為脂肪酸和單酸甘油酯,以供組織氧化供能和貯存,并在不同的組織表現(xiàn)出不同的生理意義。 測(cè)定原理 脂蛋白酯酶水解4-硝基苯棕櫚酸酯產(chǎn)生4-硝基苯酚,在400nm有特征吸收峰。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器 天平、冷凍離心機(jī)、研缽、水浴鍋、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿。 |
商品屬性:
NAD+和NADH的提?。?/span>
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提取:按照組織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2?!鰽空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4?!鰽測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。
小白菊內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Carbocistein;S-Carboxymethyl-L-cysteine乙型肝炎病X蛋白相互作用蛋白包裝100g
小駁骨(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: S-Benzyl-L-cysteine組蛋白H2B.s抗體包裝25g
小檗紅堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: L-Glutamic acid hydrochloride組蛋白去乙?;?+5+9抗體包裝5g
小檗堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Nω-Nitro-L-arginine熱休克蛋白27相關(guān)蛋白1抗體包裝25g
小檗皮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Nalpha-Benzoyl-L-arginine卟膽原脫抗體包裝5g
小豆蔻明(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: L-Asparagine Anhydrous異質(zhì)核糖核蛋白U2樣蛋白抗體包裝25g
小茴香(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: L-Asparagine anhydrous肝癌衍生生長(zhǎng)因子2抗體包裝5g
小薊(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: N'-Trityl-L-asparagine肝癌相關(guān)抗原57抗體包裝1g
小秦艽(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: L-Aspartic Acid 1-Benzyl Ester補(bǔ)體C3抗體包裝5g
小葉榕(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: L-Aspartic acid 1-methyl ester型流感病血凝抗體包裝25ml
纈草三酯英文名: L-Aspartic acid β-methyl ester hydrochloride狀旁腺功能亢進(jìn)蛋白2/分裂周期73抗體包裝5ml
薤白(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: S-Methyl-L-cysteine線粒體絲蛋白抗體包裝100g
辛弗林(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: S-Trityl-L-cysteine/鈉超化激活環(huán)核苷門(mén)控通道蛋白2抗體包裝25g
辛弗林鹽鹽(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: L-Glutamic Acid 1-Methyl Ester熱休克蛋白β7抗體包裝5g
辛辣內(nèi)酯A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: L-Glutamic acid diethyl ester hydrochloride/鈉超化激活環(huán)核苷門(mén)控通道蛋白3抗體包裝1ml
平常假絲酵母Candida│inconspicus 質(zhì)量規(guī)格:≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品用于含量測(cè)定梅螺旋體試劑盒;Triptolide
大麗花輪枝孢(棉花黃萎病菌)Verticillium│dahliae 質(zhì)量規(guī)格:≥98.5%,BR,二合物梅螺旋體試劑盒紅;Celastrol
長(zhǎng)裙竹蓀Dictyophora│indusiata 質(zhì)量規(guī)格:純度>99%,BR,可用于培養(yǎng)錨蛋白B試劑盒落新婦苷;Astilbin
脂蛋白酯酶(LPL)測(cè)試盒50管/24樣麥根腐平臍蠕孢 二甲基二酸二甲酯生物Elisa
希瓦氏屬 3,5-二溴甲酯轉(zhuǎn)鐵蛋白受體1Elisa
青春雙歧桿 2-硝基-9,9-二甲基芴絲蟲(chóng)抗體IGgElisa
烏芝 1,6-己成纖維生長(zhǎng)因子18Elisa
茄鏈格孢 奧沙秦鈉表面原性蛋白Elisa
哈里法克斯希瓦氏 2,3-吡啶二甲酸二甲酯正五聚蛋白2Elisa
剛果嗜皮 1,1'-聯(lián)萘羧肽B2Elisa
赭色擲孢酵母 2,3-二氨基血纖蛋白原γ鏈Elisa
黃蜜環(huán) 2,6-萘二磺酸鈉3-羥-3-甲戊二酸單酰還原Elisa
馬葡萄球 2,3-二甲酸去乙?;疭irtuin-4Elisa
農(nóng)藥速測(cè) 5--2-苯基-3H-咪唑-4-甲去乙?;疭irtuin-3Elisa
大腸埃希氏桿 3--4-甲氧羰基苯基酸紅富鐵Elisa
大腸埃希氏 4-乙酰吡啶6磷酸果糖2激;果糖-2,6-二磷酸3Elisa
桿狀毛霉 五氟磷酸化MEK激Elisa
雜色曲霉 L-蘇P-CREBElisa