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一次移液操作一般有哪些步驟
閱讀：2869 發(fā)布時間：2018-10-30
步：裝吸頭。移液器套柄用力下壓并小幅度旋轉(zhuǎn)即可
第二步：量程設(shè)定
1、移液器量程的設(shè)定原則：由大到小！
1)由大量程向小量程調(diào)節(jié)時：如從600μl調(diào)節(jié)至400μl，直接調(diào)節(jié)；
2)由小量程向大量程調(diào)節(jié)時：先朝所需量程方向連貫旋轉(zhuǎn)，旋轉(zhuǎn)到達(dá)超過所需量程1/3圈處，回調(diào)到所需量程處。如從20μl調(diào)節(jié)至50μl，先調(diào)節(jié)至60μl，再回旋至50μl。
注：這是因為由小量程向大量程調(diào)節(jié)時，彈簧的彈性形變在短時間內(nèi)無法*回復(fù)，需有一個恢復(fù)階段，可以想象一下剛從沙發(fā)上起身時，沙發(fā)墊恢復(fù)原狀也是需要一定時間的。
*正確的量程設(shè)定可以提高0.5%的移液準(zhǔn)確性！
2、量程范圍的選擇
選擇量程時，需要注意，一般在 10%-100% 量程范圍內(nèi)可以操作，但在 10% 量程操作需要較高的操作技巧。因此建議的佳量程是35%-100% 量程范圍。在此量程范圍，對操作技巧依賴更少，并保證移液的準(zhǔn)確性和精度。從表中可以看出，當(dāng)選擇的量程范圍越小，移液的準(zhǔn)確性和重復(fù)性就會越差。
*選擇合適的吸頭量程，可提高1%移液準(zhǔn)確性！
第三步：潤洗吸頭
用同一樣品對吸頭進(jìn)行潤洗。先吸取樣品，然后排回樣品池或廢液槽。充分吸液排液2-3次。
潤洗的作用：
1.在吸頭內(nèi)形成同質(zhì)膜，降低吸頭對樣品的吸附；
2.有助于提高吸頭多次相同移液操作的一致性。
注意：對于高溫/低溫樣品，由于熱脹冷縮帶來更大的誤差，不建議潤洗。
*潤洗吸頭可提高0.5%的移液準(zhǔn)確性!
第四步：吸液
此步影響移液準(zhǔn)確性的因素主要有以下4點：
1、吸頭浸入角度：建議盡量保持垂直，傾斜角度不大于15°。
*正確的移液角度，可提高2.5%移液準(zhǔn)確性！
2、吸頭的浸入深度：10μl以下的吸頭，浸入深度為1-2mm；10-200μl的吸頭，浸入深度為2-3mm；200-2000μl的吸頭，浸入深度為3-6mm；2000μl以上的吸頭，浸入深度為6-10mm。
*以正確吸頭浸入深度進(jìn)行吸液操作可提高1%的移液準(zhǔn)確性(微量程移液器可達(dá)5%)！
3、吸頭浸入時間：吸液后保持吸頭浸入液面少1秒，然后將吸頭平緩移開液面。對吸取大容量樣品或者高粘度樣品尤為重要。
4、吸液速度：吸液通常采用一檔吸液、二擋排液，在吸液時保持平順，緩慢松開活塞，控制好吸液速度。過快的吸液速度，會導(dǎo)致形成氣柱，使移液不準(zhǔn)確；樣品液進(jìn)入套柄，對活塞和密封圈造成損傷；帶入氣霧，造成樣品交叉污染。
*不正確的吸液速度會導(dǎo)致至少5%的準(zhǔn)確性下降！
第五步：排液和吹液
先將排液按鈕按至檔(排液檔)，略作停頓以后，再按至第二檔(吹液檔)。
常規(guī)排液操作：
1.沿內(nèi)壁排液(常規(guī))
2.直接排入液面下:直接排入液面排液時要保持活塞下壓再離開液面，否則容易導(dǎo)致倒吸！
3.在液面上方排液
*正確的排液技術(shù)提高1%的移液準(zhǔn)確性！