犬狂犬病毒抗體檢測試劑盒
使用說明書
【介紹】
狂犬病毒(Rabies virus, RBV)抗體檢測試劑盒用于檢測貓、犬等動物血清中的狂犬病毒抗體,用于評估狂犬病毒疫苗免疫狀況。
本試劑盒采用阻斷ELISA法,在酶標板條微孔上預包被狂犬病毒抗原。在試驗中,加入稀釋后的待檢血清,經(jīng)過溫育后,若樣品中含有狂犬病毒特異性抗體,則與包被板上的抗原結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后;再加入酶標的抗狂犬病毒單抗,樣本中的抗體阻斷了單抗與包被板上抗原的結(jié)合;經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物;在微孔中加入TMB底物液,經(jīng)酶催化產(chǎn)生的藍色信號與樣本中的抗體含量成反比,加入終止液終止反應后,用酶標儀450nm波長測定反應孔中的吸光度A值。
【組份】
1 | 抗原預包被板條 | 1/2塊 | 7 | 終止液 | 11ml |
2 | 酶結(jié)合物 | 11/22ml | 8 | 陰性對照 | 1/2ml |
3 | 10倍濃縮洗滌液 | 100ml | 9 | 陽性對照 | 0.5/1ml |
4 | 樣本稀釋液 | 50ml | 10 | 封板膜 | 2/4張 |
5 | 顯色液 | 11/22ml |
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6 | 說明書 | 1份 |
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【需自備的設備及試劑】
- 微量移液器:10µl-100µl、100µl-1000µl。
- 一次性移液器吸頭。
- 量筒:500ml。
- 96孔板酶標儀。
- 蒸餾水或去離子水。
- 洗瓶或洗板機。
【樣品制備】
取動物全血,按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無溶血。
【洗滌液的準備】
濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫,如有鹽結(jié)晶,搖動使結(jié)晶的鹽溶解,然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。
【注意事項】
- 試劑盒使用前各試劑應平衡至室溫,使用前應搖勻,使用后放回2-8℃。
- 不同品種、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用,使用試劑時應防止試劑污染。
- 底物和終止液對皮膚和眼可能有刺激性,使用時應該注意防護。
- TMB(顯色液)不要暴露于強光和避免接觸氧化劑。
- 檢測板拆封后應避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中,并盡快置于2-8℃)。
- 所有廢棄物在丟棄之前應合理處理以免污染。
- 嚴格遵守操作說明可以獲得H的結(jié)果。操作過程中移液、定時和洗滌等的全部過程必須精q。
- 抗原包被板為一次性用品,不得重復使用;
【操作步驟】
- 每次試驗均設置空白孔1孔、陽性對照1孔、陰性對照2孔,陰性對照、陽性對照直接取100ul/孔加入孔內(nèi);
- 將樣品稀釋液按90ul/孔加入到微孔反應板內(nèi),之后將待檢樣品血清按10ul/孔加入孔內(nèi)并吹打混勻(移液器槍頭請勿混用);
- 蓋上封板膜(可按實際需要自行裁剪),置37℃溫育60分鐘。
- 小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作濃度洗滌液每孔加250ul,后甩去孔內(nèi)液體,以上步驟重復4-6次,后在干凈吸水紙上拍干。
- 除空白對照孔外,每孔加酶結(jié)合物100μl,蓋上封板膜,置37℃溫育30分鐘。
- 小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗滌4-6次, 方法同4。切記后在干凈吸水紙上拍干。
- 每孔加顯色液100µl,混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色15分鐘。
- 每孔加終止液50μl,使反應終止,10分鐘內(nèi)測定結(jié)果。
【結(jié)果判定】
以空白對照調(diào)零用酶標儀于450nm(630nm作參比波長)讀取吸光度A值。
試驗成立的條件是:
N值>0.5、同時陽性對照(P)阻斷率>50%;
計算方法:
PI (阻斷率)= 1 —(樣品OD值 / 陰性OD均值)
陰陽性判斷:
PI(阻斷率)>40%則判斷為陽性;
PI≤40%則判斷為陰性。
注:(PI=40%相當于抗體滴定度0.5IU/ml)
【有效期】
貯存方法: 2 - 8ºC下貯存。
有效期: 12個月。