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        1. 上海研謹(jǐn)生物科技有限公司

          含多酚或淀粉的植物組織總RNA提取技巧

          時(shí)間:2021-8-5閱讀:1055
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          復(fù)雜植物總RNA提取試劑說(shuō)明書(shū)

          RNApurePlantPlusReagent

          復(fù)雜植物總RNA提取試劑

          

          Cat.No.  K0537 

          保存:    2-8

          組分說(shuō)明

          Cat.No.                   K0537        K0537A

          復(fù)雜植物總RNA 提取試劑    16ml        80ml

          產(chǎn)品簡(jiǎn)介

              本試劑可從植物組織、特別是富含多酚或淀粉的植物組織(如甘蔗、馬鈴薯塊莖、松針、蘋果、香蕉、山藥等)中,提取總RNA,操作方便、快捷。每 100ml(加入β-巰基乙醇后的終體積)可處理 100mg 組織 200 次,處理 5g 組織 4次。由本試劑提取的 RNA 純度高,可直接應(yīng)用于下游實(shí)驗(yàn),如 cDNA 合成、RT-PCR、Real-timeRT-PCR、NorthernBlot、

          DotBlot、體外翻譯等。

          注意事項(xiàng)

          1.  預(yù)防RNase污染,應(yīng)注意以下幾方面:

             1)使用無(wú)RNase的塑料制品和槍頭,避免交叉污染。

             2)玻璃器皿應(yīng)在使用前于180℃高溫下干烤4小時(shí),塑料器皿可在0.5MNaOH中浸泡10分鐘,用水*沖洗后高壓滅菌。

             3)配制溶液應(yīng)使用無(wú)RNase的水。

             4)操作人員戴一次性口罩和手套,實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要勤換手套。

          2.  提取的樣品避免反復(fù)凍融,否則影響RNA提取得率和質(zhì)量。

          3.  復(fù)雜植物總RNA提取試劑在使用前請(qǐng)加入β-巰基乙醇,將β-巰基乙醇與復(fù)雜植物總RNA提取試劑以1:4的體積混合,加 入β-巰基乙醇后的復(fù)雜植物總RNA提取試劑可在4℃保存1個(gè)月。

          4.  本品中含有苯酚,具有毒性和腐蝕性。如果吸入體內(nèi)、接觸皮膚、吞食等會(huì)導(dǎo)致中毒、灼傷以及其他身體傷害。使用本制品時(shí)應(yīng)穿戴防護(hù)物品,如防護(hù)服裝、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接觸到眼睛,應(yīng)立即用大量的水沖洗并前往醫(yī)院治療。

          5.  保存在 75%乙醇中的 RNA 沉淀,2-8℃可以保存一周,-20℃條件下可以保存 1 年。RNA 半衰期比較短,容易降解,

             建議提取后盡快進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn),如反轉(zhuǎn)錄成 cDNA,NorthernBlot 等。

          6.  若下游實(shí)驗(yàn)對(duì) DNA 非常敏感,建議用不含 RNase DNaseI(貨號(hào):K2090)對(duì) RNA 進(jìn)行處理。

          自備試劑:β-巰基乙醇、5MNaCl、氯仿、異丙醇、75%乙醇、無(wú)RNase的水

          操作步驟

          小量樣本提取步驟:

          1.   取不多于100mg的新鮮植物組織在液氮中充分研磨,將研磨后的粉末收集到離心管(自備)中。

          2.   加入500 μl 復(fù)雜植物總RNA抽提試劑(使用前檢查是否加入β-巰基乙醇,β-巰基乙醇與復(fù)雜植物總RNA提取試劑以1:4的體積混合),反復(fù)吹打幾次,使樣本充分裂解。室溫放置5分鐘,使蛋白核酸復(fù)合物*分離。

          3.   4 12,000rpm離心1分鐘,將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的RNase-Free離心管(自備)中。

          4.   在得到的水相溶液中加入100μl5MNaCl,混勻。

          5.   加入300μl 氯仿,上下顛倒充分混勻。

          6.   4 12,000rpm離心10分鐘,將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的RNase-Free離心管(自備)中。注意:若提取的植物組織中富含多糖多酚,可重復(fù)步驟5、6一次。

          7.   加入等體積的異丙醇,混勻,室溫放置10分鐘。

          8.   4 12,000rpm離心10分鐘,小心吸棄上清,注意不要吸棄RNA沉淀。

          9.   加入1ml75%乙醇,4 5,000rpm離心3分鐘,小心吸棄上清,注意不要吸棄沉淀。

              注意:剩余的少量液體可短暫離心,然后用槍頭吸出,注意不要吸棄沉淀。

          10.  室溫放置2-3分鐘,晾干。加入30-50μl 無(wú)RNase的水,充分溶解RNA,得到的RNA保存在-70℃,防止降解。

              注意:沉淀不要過(guò)分干燥,以免難于溶解。

          大量樣本提取步驟:

          1.   1g的新鮮植物組織在液氮中充分研磨,將研磨后的粉末收集到離心管(自備)中。

          2.   加入5ml 復(fù)雜植物總RNA抽提試劑(使用前檢查是否加入β-巰基乙醇,β-巰基乙醇與復(fù)雜植物總RNA提取試劑以1:4的體積混合),反復(fù)吹打幾次,使樣本充分裂解。室溫放置5分鐘,使蛋白核酸復(fù)合物*分離。

          3.   4 10,000rpm離心1分鐘,將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的RNase-Free離心管(自備)中。

          4.   10ml 上清水相溶液中加入2ml5MNaCl,混勻。

          5.   10ml 上清水相溶液中加入6ml 氯仿,上下顛倒混勻。

          6.   4 10,000rpm離心15分鐘,將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的RNase-Free離心管(自備)中。

             注意:若提取的植物組織中富含多糖多酚,可重復(fù)步驟56一次。

          7.   加入0.9倍體積的異丙醇,混勻,室溫放置10分鐘。

          8.   4 10,000rpm離心15分鐘,小心吸棄上清,注意不要吸棄RNA沉淀。

          9.   加入5-10ml75%乙醇,4 5,000rpm離心5分鐘,小心吸棄上清,注意不要吸棄沉淀。

          注意:剩余的少量液體可短暫離心,然后用槍頭吸出,注意不要吸棄沉淀。

          10.  室溫放置2-3分鐘,晾干。加入200μl 無(wú)RNase的水,充分溶解RNA,得到的RNA保存在-70℃,防止降解。

          注意:沉淀不要過(guò)分干燥,以免難于溶解。

           

          實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

          免疫組化IHC染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

          細(xì)胞、組織TUNEL凋亡染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

          試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)

          實(shí)驗(yàn)室代做實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目

           

          透射電鏡服務(wù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

          石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

          核仁組成區(qū)嗜銀-AGNOR染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

          免疫共沉淀(CHIRP)實(shí)驗(yàn)

          RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP)實(shí)驗(yàn)代做

          酶聯(lián)免疫(ELISA)技術(shù)服務(wù)

          雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒

          喹諾酮類快速檢測(cè)試劑盒

          組織芯片/微陣列定制技術(shù)服務(wù)

          染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

          多因子液相芯片技術(shù)(Luminex)實(shí)驗(yàn)

          免疫細(xì)胞化學(xué)ICC實(shí)驗(yàn)服務(wù)

          ATP/ADP檢測(cè)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

          蛋白雙向(2-D)電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù)

          蛋白相互作用分析

          堿性磷酸酶染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

          PKC活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

          非標(biāo)定量實(shí)驗(yàn)

          (Label-free)

          DIGE技術(shù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

          端粒酶活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

          細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

          掃描電鏡服務(wù)

          NF-KB p65活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

          慢病毒包裝實(shí)驗(yàn)服務(wù)

           

           

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