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        1. 上海研謹(jǐn)生物科技有限公司

          小鼠成纖維細(xì)胞(L-929)培養(yǎng)說(shuō)明書

          時(shí)間:2021-4-29閱讀:2200
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          小鼠成纖維細(xì)胞(L-929)培養(yǎng)說(shuō)明書

           

          細(xì)胞介紹

          1948年三月建立了NCTC clone 929(小鼠結(jié)締組織),細(xì)胞系L的克隆。細(xì)胞系L是最早建立的連續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞系之一,clone 929是最早的克隆株。從一只100日齡的雄性C3H/An小鼠的正常皮下疏松結(jié)締組織入脂肪組織中建立了親本細(xì)胞系L。 第95代的細(xì)胞系L使用毛細(xì)管法分離單細(xì)胞建立了clone929。檢測(cè)發(fā)現(xiàn)鼠痘病毒陰性。

           

          細(xì)胞特性

          1) 來(lái)源:組織:皮下結(jié)締組織;疏松結(jié)締組織及脂肪 品系:C3H/An

          2) 形態(tài)成纖維細(xì)胞

          3) 含量:>1x106 個(gè)/mL

          4) 污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

          5) 規(guī)格:T75或者1mL凍存管包裝

           

          運(yùn)輸和保存:可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式:1干冰運(yùn)輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇;2存活細(xì)胞,收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng),傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

           

          細(xì)胞用途:僅供科研使用。

                                 

          細(xì)胞培養(yǎng)步驟

          一.培養(yǎng)基培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

          1) 準(zhǔn)MEM培養(yǎng)基(MEM,GIBCO,貨號(hào)C11095500BT,添NaHCO3 1.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%

          2) 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

          3) 凍存液90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)。液氮儲(chǔ)存。

          二. 細(xì)胞處理

          1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或將細(xì)胞懸液加入10cm皿中,加入8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

          2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

          對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

          1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2。

          2. 2ml消化液0.25%Trypsin-0.53mM EDTA培養(yǎng)瓶中,置于37培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

          3. 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

          4. 將細(xì)胞懸液按1215的比例分到新的8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

          3)細(xì)胞凍存:細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO進(jìn)行凍存。

           

          注意事項(xiàng):

          1. 收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

          2. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

           

           

          實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

           

          免疫組化IHC染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

          細(xì)胞、組織TUNEL凋亡染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

          試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)

          實(shí)驗(yàn)室代做實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目

           

          透射電鏡服務(wù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

          石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

          核仁組成區(qū)嗜銀-AGNOR染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

          免疫共沉淀(CHIRP)實(shí)驗(yàn)

          RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP)實(shí)驗(yàn)代做

          酶聯(lián)免疫(ELISA)技術(shù)服務(wù)

          雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒

          喹諾酮類快速檢測(cè)試劑盒

          組織芯片/微陣列定制技術(shù)服務(wù)

           

          染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

           

          多因子液相芯片技術(shù)(Luminex)實(shí)驗(yàn)

          免疫細(xì)胞化學(xué)ICC實(shí)驗(yàn)服務(wù)

          ATP/ADP檢測(cè)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

          蛋白雙向(2-D)電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù)

          蛋白相互作用分析

          堿性磷酸酶染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

          PKC活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

          非標(biāo)定量實(shí)驗(yàn)

          (Label-free)

           

          DIGE技術(shù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

          端粒酶活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

          細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

          掃描電鏡服務(wù)

          NF-KB p65活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

           

          慢病毒包裝實(shí)驗(yàn)服務(wù)

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