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        1. 上海研謹生物科技有限公司

          通用型維生素E高效液相色譜法定量檢測試劑盒

          時間:2021-2-23閱讀:1382
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          通用型維生素E高效液相色譜法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)

           

          主要用途

           

          GENMED通用型維生素E高效液相色譜法定量檢測試劑是一種旨在通過有機溶劑萃取,必要時皂化處理,進而在高效液相色譜儀和紫外光譜下(294nm波長)檢測分析,分離出可溶性維生素E波峰,以定量測定樣品中α-生育酚的含量權(quán)+_威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種油類、植物、蔬菜、食品、血液等樣品中維生素E檢測(包括α、βγ、δ形式)產(chǎn)品嚴格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定。

           

          技術(shù)背景

           

          維生素Evitamin E),又稱為生育酚(tocophenol;TCP),是一種由各種甲基化的酚類構(gòu)成的有機化合物,為脂溶性抗氧化劑。維生素E分成8種形式:4種生育酚,4種生育三烯酚(Tocotrienols),分別有α、β、γ、δ。其中α-生育酚是維生E中+*具活性,也是_+常見代表,在食物添加劑的命名上標記為E307。成年人的建議日攝入用量是15毫克。維生素E在植物、藻類等合成,而不能在動物中產(chǎn)生。維生素E在麥類、素油、水果、果仁、魚、蔬菜等中含量豐富,包括棕櫚油、橄欖油、豆油、奶油花生等。維生素E具有預(yù)防自發(fā)流產(chǎn)、增強免疫功能、防止未飽和脂肪酸、低密度脂蛋白和細胞膜的氧化、清除自由基、預(yù)防冠心病等作用。維生素E缺乏將導致神經(jīng)性疾患,例如脊髓小腦性共濟失調(diào)(spinocerebellar ataxia)、肌?。?/font>myopathies)、貧血等。通過有機溶劑萃取,必要時進行皂化處理,排除脂類、蛋白和碳水化合物的干擾,進而在高效液相色譜儀和紫外光譜下(294nm波長)檢測分析,分離出可溶性維生素E波峰,以定量α-生育酚的含量。

           

          產(chǎn)品內(nèi)容

           

          GENMED處理液(Reagent A       20毫升

          GENMED皂化液(Reagent B  20毫升

          GENMED酸性液(Reagent C       20毫升

          GENMED萃取液(Reagent D   100毫升

          GENMED溶解液(Reagent E       20毫升

          GENMED流相液(Reagent F      500毫升

          GENMED標準液(Reagent G    500微升

          產(chǎn)品說明書      1

           

          保存方式

           

          保存GENMED標準液(Reagent G)在-20冰箱里,其余的保存在4冰箱里,避免光照;試劑具有揮發(fā)性,注意密閉瓶蓋;GENMED皂化液(Reagent B)和GENMED酸性液(Reagent C)具有腐蝕性,注意操作安全;有效保證6

           

          用戶自備

           

          1.5毫升離心管:用于樣品處理和標準液配制的容器

          15毫升錐形離心管:用于樣品處理的容器

          (微型)臺式離心機:用于樣品處理

          DOUNCE勻漿器:用于裂解樣品

          恒溫水槽或培養(yǎng)箱:用于樣品反應(yīng)孵育和晾干

          高效液相色譜儀(HPLC):用于定量測定

           

          實驗步驟

           

          • 樣品準備 

           

          1)固態(tài)樣品準備

          • 秤取50待測固態(tài)樣品  
          • 移入一個液氮凍存管
          • 即刻放進液氮罐過夜
          • 次日從液氮罐里取出,即刻(_+快速度)碾碎組織成粉末(注意:切莫使樣品凍融
          • 加入500GENMED處理液(Reagent A
          • 全部轉(zhuǎn)移到DOUNCE勻漿器
          • 用勻漿棒勻化組織(約80下)
          • 全部轉(zhuǎn)移到1.5毫升離心管
          • 放進微型臺式離心機離心10分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf 5415
          • 小心移取上清液到15毫升錐形離心管
          • 再加入500微升GENMED處理液(Reagent A到含有沉淀顆粒的1.5毫升離心管中
          • 渦旋震蕩1分鐘
          • 放進微型臺式離心機離心10分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf 5415
          • 小心移取上清液合并到上述15毫升錐形離心管中(總量1毫升)
          • (選擇步驟)加入1毫升GENMED皂化液(Reagent B
          • (選擇步驟)渦旋震蕩15
          • (選擇步驟)放進70恒溫水槽孵育30分鐘,其間每隔10分鐘渦旋震蕩5秒一次
          • (選擇步驟)置于冰槽里冷卻1分鐘
          • (選擇步驟)加入1毫升GENMED酸性液(Reagent C,混勻
          • 加入4毫升GENMED萃取液(Reagent D
          • 強力渦旋震蕩15
          • 重復實驗步驟21二次
          • 放進臺式離心機離心10分鐘,速度為1300g 
          • 移取上層液相到新的15毫升錐形離心管
          • 放進40干式培養(yǎng)箱晾干
          • 加入500微升30預(yù)熱的GENMED溶解液(Reagent E,混勻
          • 即刻進行高效液相色譜分析(注意:如果暫時保存,建議在4不超過48小時;-20不超過3月)

           

          2)液態(tài)樣品準備

          • 移取500微升待測液態(tài)樣品1.5毫升離心管
          • 加入500微升GENMED處理液(Reagent A 
          • 渦旋震蕩1分鐘
          • 放進微型臺式離心機離心10分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf 5415
          • 小心移取上清液到15毫升錐形離心管中
          • (選擇步驟)加入1毫升GENMED皂化液(Reagent B
          • (選擇步驟)渦旋震蕩15
          • (選擇步驟)放進70恒溫水槽孵育30分鐘,其間每隔10分鐘渦旋震蕩5秒一次
          • (選擇步驟)置于冰槽里冷卻1分鐘
          • (選擇步驟)加入1毫升GENMED酸性液(Reagent C,混勻
          • 加入4毫升GENMED萃取液(Reagent D
          • 強力渦旋震蕩15
          • 重復實驗步驟12二次
          • 放進臺式離心機離心10分鐘,速度為1300g 
          • 移取上層液相到新的15毫升錐形離心管
          • 放進40干式培養(yǎng)箱晾干
          • 加入500微升30預(yù)熱的GENMED溶解液(Reagent E,混勻,避光
          • 即刻進行高效液相色譜分析(注意:如果暫時保存,建議在4不超過48小時;-20不超過3月)

           

          • 測定準備

           

          • 開啟儀器預(yù)熱15分鐘
          • 根據(jù)下表設(shè)置高效液相色譜儀(HPLC)參數(shù)

           

          參數(shù)

          推薦一

          推薦二

          推薦三

          補充說明

          色譜柱

          長度:25cm

          直徑:4.6mm

          長度:15cm

          直徑:3.9mm

          長度:12.5cm

          直徑:4.0mm

          Waters儀器或

          Agilent儀器

          固定相

          ODS

          ODS

          ODS

           

          流動相

          GENMED流相液(Reagent F

           

          流速

          1毫升/分鐘

          1毫升/分鐘

          1毫升/分鐘

           

          注射容量

          20微升

          20微升

          20微升

          10微升至100微升

          檢測

          紫外

          紫外

          紫外

           

          波長

          294nm

          294nm

          294nm

          290300nm

          柱溫

          40

          40

          40

          2545

          峰值時間(retention

          5分鐘

          16分鐘

          10分鐘

          參考

          運行時間

          10分鐘

          20分鐘

          15分鐘

          參考

           

          • 使用GENMED流相液(Reagent F運行1次(30毫升),以達到色譜柱均衡和溫度穩(wěn)定

           

          • 標準樣品配制

           

          • 準備好51.5毫升離心管,標記為15號管
          • 分別加入100微升GENMED溶解液(Reagent E15號管
          • 移取100微升GENMED標準液(Reagent G1號管,混勻
          • 小心移取100微升1號管稀釋的GENMED標準液(Reagent G2號管,混勻
          • 小心移取100微升2號管稀釋的GENMED標準液(Reagent G3號管,混勻
          • 小心移取100微升3號管稀釋的GENMED標準液(Reagent G4號管,混勻
          • 15號管放進冰槽里備用,避免光照;標準管濃度見下表

          管號

          GENMED溶解液(Reagent E

          GENMED標準液(Reagent G

          標準α-生育酚濃度

          1

          100微升

          100微升

          20微克/毫升

          2

          100微升

          100微升1號管

          10微克/毫升

          3

          100微升

          100微升2號管

          5微克/毫升

          4

          100微升

          100微升3號管

          2.5微克/毫升

          5

          100微升

          0

          0

           

          四、色譜分析

           

          • 將上述配制的GENMED標準液(Reagent G和待測樣品放進30培養(yǎng)箱預(yù)熱
          • 每次(每個樣品)注射20微升
          • 每次(每個樣品)運行1020分鐘
          • 獲得色譜波峰圖:波峰面積(peak area)或峰值,保存記錄
          • 全部運行完成,使用適量的GENMED流相液(Reagent F清洗色譜柱

           

          五、計算含量

           

          • 方法一:通過儀器中的軟件進行測算
          • 方法二:構(gòu)建標準曲線:縱座標(Y軸)為波峰面積(peak area;橫座標(X軸)為標準α-生育酚濃度(微克/毫升),根據(jù)標準曲線獲得樣品對應(yīng)α-生育酚濃度(微克/毫升)
          • 方法三:公式計算(選擇單一濃度的標準液)

           

          樣本α-生育酚濃度(微克/毫升)=【樣本波峰面積(peak areaX標準α-生育酚濃度】÷對應(yīng)標準α-生育酚濃度的波峰面積

           

          注意事項

           

          • 本產(chǎn)品為20次操作
          • 本產(chǎn)品可以用于β、γ、δ-生育酚的檢測
          • 本產(chǎn)品檢測范圍是0.350毫克/
          • 操作時,須戴手套
          • 試劑具有揮發(fā)性,注意密閉瓶蓋或使用封口膜
          • 如果樣品中脂類含量高,建議皂化處理
          • GENMED皂化液(Reagent BGENMED酸性液(Reagent C具有腐蝕性,注意操作安全
          • 建議使用GENMED溶解液(Reagent E作為陰性對照或作為基準線
          • 色譜柱的異物殘留、氣泡產(chǎn)生、溫度未達均衡等將導致異常波峰、時間偏移等
          • 用戶可以使用已知濃度的GENMED標準液(Reagent G)或醋酸生育酚作為內(nèi)參標準加入到樣品中,然后進行萃取,檢測回收率(recovery
          • α-生育酚的HPLC參考圖譜如下

           

           

           

          • α-生育酚的出峰時間(retention)以用戶操作時,使用的GENMED標準液(Reagent G)實際出峰為準
          • 用戶可以使用熒光檢測:激發(fā)波長290nm,散發(fā)波長330nm
          • 本公司提供系列維生素檢測試劑產(chǎn)品

           

          質(zhì)量標準

           

          • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
          • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感

           

          使用承諾

           

          秉著信譽至上、客戶滿意、質(zhì)量承諾的宗旨為我們的用戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)。用戶收到貨后,應(yīng)按照產(chǎn)品說明書上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷售前已作嚴格的質(zhì)量鑒定,保證說明書所述的使用效果。在貨到后10天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問題,請立即以書面形式(實驗報告)與本公司聯(lián)系,并將該產(chǎn)品退回,經(jīng)檢驗確系產(chǎn)品質(zhì)量所致,本公司負責更換產(chǎn)品。如系使用者錯誤操作所致,本公司不承擔由此造成的損失。

           

          友情提醒

           

          IF IT DOESN’T WORK, RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

           

          訂購信息

           

          單組份訂購信息

           

          編號 名稱 規(guī)格

          GMS19071.2.1 GENMED通用型維生素E高效液相色譜法定量檢測試劑盒 20

          GMS19071.2.1A GENMED處理液(Reagent A     100毫升

          GMS19071.2.1B GENMED皂化液(Reagent B 100毫升

          GMS19071.2.1C GENMED酸性液(Reagent C      100毫升

          GMS19071.2.1D GENMED萃取液(Reagent D 100毫升

          GMS19071.2.1E GENMED溶解液(Reagent E 100毫升

          GMS19071.2.1F GENMED流相液(Reagent F 500毫升

          GMS19071.2.1G GENMED標準液(Reagent G      10毫升

           

           

           

          試劑盒訂購信息 

           

          產(chǎn)品編號

          名稱

          規(guī)格

          GMS19071.1

          維生素E比色法定量檢測試劑盒

          20

          GMS19071.2.1

          通用型維生素E高效液相色譜法定量檢測試劑盒

          20

          GMS19071.2.2

          血液維生素E高效液相色譜法定量檢測試劑盒

          20

          GMS19071.2.3

          尿液維生素E高效液相色譜法定量檢測試劑盒

          20

          GMS19071.2.4

          奶品維生素E高效液相色譜法定量檢測試劑盒

          20

          GMS19071.2.5

          植物維生素E高效液相色譜法定量檢測試劑盒

          20

          GMS19071.2.6

          藻類維生素E高效液相色譜法定量檢測試劑盒

          20

          GMS19071.2.7

          油類維生素E高效液相色譜法定量檢測試劑盒

          20

           

          實驗代做服務(wù):

           

          免疫組化IHC染色實驗服務(wù)

          細胞、組織TUNEL凋亡染色實驗服務(wù)

          試劑盒免費代檢測

          實驗室代做實驗項目

           

          透射電鏡服務(wù)實驗服務(wù)

          石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

          核仁組成區(qū)嗜銀-AGNOR染色實驗服務(wù)

          免疫共沉淀(CHIRP)實驗

          RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP)實驗代做

          酶聯(lián)免疫(ELISA)技術(shù)服務(wù)

          雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒

          喹諾酮類快速檢測試劑盒

          組織芯片/微陣列定制技術(shù)服務(wù)

           

          染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實驗服務(wù)

           

          多因子液相芯片技術(shù)(Luminex)實驗

          免疫細胞化學ICC實驗服務(wù)

          ATP/ADP檢測實驗服務(wù)

          蛋白雙向(2-D)電泳實驗服務(wù)

          蛋白相互作用分析

          堿性磷酸酶染色實驗服務(wù)

          PKC活性檢測實驗

          非標定量實驗

          (Label-free)

           

          DIGE技術(shù)實驗服務(wù)

          端粒酶活性檢測實驗

          細胞生長曲線的測定

          掃描電鏡服務(wù)

          NF-KB p65活性檢測實驗

           

          慢病毒包裝實驗服務(wù)

           

           

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